海洋石油降解菌筛选、菌群构建及降解基因初步研究.pdf

摘要 海洋石油降解菌的筛选、菌群构建及降解基因的初步研究 摘要 随着海洋石油开采及海上油运的发展，溢油事故频频发生，造成严重的海洋 石油污染。石油污染给海洋环境和海洋生态系统带来了严重的危害，直接或间接 的影响着人类的生存和可持续发展。目前国际上常用的治理方法主要有物理、化 学和生物处理法三类，其中生物修复技术由于具有原位处理、不产生二次污染等 优点，展现出良好的应用前景。微生物在海洋溢油的生物修复中发挥了至关重要 的作用，如何筛选并构建高效石油降解菌已成为国内外研究的热点。在微生物降 解石油过程中，通常是由烷烃羟化酶基因(alkB)及其编码的烷烃羟化酶启动了烷 烃的降解，烷烃羟化酶也是整个降解途径中的关键酶。因此，对烷烃降解菌和烷 烃羟化酶基因的研究对于了解石油降解菌的降解机制，完善生物修复技术具有较 高的理论和应用价值。 本文以石油为唯一碳源，从胜利油田滩涂、南海及黄海沉积物、青岛沿岸河 口及近海潮间带地区8个站点筛选出42株细菌，它们属于18个不同的属，其中 丫．变形菌纲(64％)和a．变形菌纲(19％)较为丰富，其次为放线菌纲(10％)， 黄杆菌纲(5％)和D．变形菌纲(2％)。通过单菌石油降解能力验证，发现存 能降解短链及长链烷烃，其中菌株SL4C具有降解萘和菲的能力：这13株菌均 有一定降低水油界面张力的能力，添加降解菌的样品测得的表面张力在 31．56--47．13mN／m之间，明显低于对照样品的表面张力(55．46mN／m)。结合 PCR．DGGE技术对胜利油田滩涂区进行菌群多样性分析，发现该区优势菌群有Y． 1％)、放线菌纲(1 1％) 变形菌纲(61％)、￡．变形菌纲(1 1％)、黄杆菌纲(1 和a．变形菌纲(5．5％)。 基于石油降解菌降解特性以及胜利油田菌群多样性分析，挑选9株石油降解 菌构建3个降解菌群，通过平板计数及PCR．DGGE技术动态监测菌群结构变化， 结果显示降解菌间存在明显的相互抑制和协同作用：芳烃降解菌SL4C较难与其 1 摘要 他降解菌配伍使用，同菌属间拮抗作用较小。3个降解菌群对石油的降解率在 90．1％～93．8％之间，高于单菌对石油的降解率。 设计4对引物扩增一株海杆菌(Marinobactersp．P1．14D)的烷烃羟化酶基因， VT8 alkB2相似度98．25％，氨基酸相似度98．50％；alkB2与M aquaeolei aquaeolei VT8 基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性，均含有烷烃羟化酶的四个保守基序 包含了烷烃羟化酶活性中心结构的重要信息。 关键词：海洋石油污染；降解菌；细菌多样性；降解菌群；烷烃羟化酶 2 ABSTRACT Screeni ofMari Re0i I i Bacteri i onof ng Degradng a，Construct i Bacteri aI Consorti umandPri of ng maryStudy Degrad i onGenes Degradat ABSTRACT Withthe ofmarineoil and oil the of developm