外燥小鼠模型的立与评价.pdf

中文摘要 中医证候动物模型是在中医学整体观念及辨证施治思想指导下，运用 脏象学说和病因病机理论，把人类疾病原型的某些特征在动物身上模拟复 制，是中医学人体证候的具体再现，是开展中医证候及中药药理研究和新 药开发的一个重要途径。 燥，为自然界六气之一，是秋之主气。“岁金太过或“岁木不及”， 则燥气可化为致病因素，称为燥邪，因其来源于外，故常称为外燥。外燥 是中医病因学说的重要组成部分，但对外燥理论与实验的研究均较少。本 课题在前期研究的基础之上，拟通过总结中医动物模型以及中医证候动物 模型的研究方法，结合外燥的病机特点，探讨建立外燥动物模型的途径， 并通过实验研究观察外燥动物模型的病理变化规律，对外燥动物模型进行 评价，为建立稳定的、可靠的、可重复的外燥小鼠动物模型提供依据。 一、理论研究 (一)外燥小鼠模型遣模因素的选择 中医动物模型复制的诸多方法虽然各自有显著的优点，但是均有明显 的不足之处。课题组在导师张六通教授的指导下，回顾了半个世纪以来中 医证候动物模型的研究历程，认为中医证候动物模型的研究应该从三个方 面出发：优化动物模型的造模因素；建立规范的动物模型评价方法；选择具 有特征性的评价指标。外燥动物模型应该在外燥相关理论的指导下，复制 符合外燥病机和证候的动物模型。 外燥的流行责之于“岁金太过或“岁木不及，其产生原因与我国 的地理结构和气候特点相关，我国的气候存在湿-+干转换时间短于干-◆湿 转换时间的特征，所以秋之燥气容易化为燥邪。模拟秋季气候变化的方法 建立外燥小鼠模型，既可较好地体现外燥的变化规律，也可避免以极端干 燥地区湿度条件为基础的研究结果对动物模型稳定性和可重复性的影响。 (二)外燥小鼠模型评价方法的探讨 外燥的病理变化有两个主要特点： 燥性干涩，易伤津液；燥易伤肺， 影响肺的宣发肃降功能，可见口鼻干燥，咽干口渴，干咳少痰，或痰液胶 黏难咯等症状。 现代研究发现卫气的防御作用与肺部免疫效应密切相关，研究显示卫 气的运行节律与免疫节律高度一致，并且卫气虚的患者IgG，IgA，IgE 的含量有明显变化。外燥动物模型支气管肺泡灌洗液中IgA、IgG和SP-A 含量的变化可以较全面地反映呼吸道不同部位免疫能力的改变，可以反映 外燥动物模型肺气卫外功能变化的规律。 气道粘膜由细胞层和粘液层组成。气道粘液层有两部分：凝胶层和溶 胶层。气道粘液层的变化，可在一定程度上反映吸入空气对气道津液代谢 影响的规律。气道Muc5acmRNA及其蛋白的表达可在一定程度上反映气道 mRNA及其蛋白的表达可提示气道溶胶层的变 凝胶层的变化，而气道AQP5 化，通过观察气道Muc5ac和AQP5mRNA及其蛋白表达的变化可揭示肺津 液代谢的规律。 二、实验研究 (一)动物及分组． 0只，体重1 SPF级BALB／c小鼠7 8士lg，雌雄各半。由湖北省实验动 008-2 005。 物研究中心提供，许可证号：SCXK(鄂)2 实验动物在实验室常规饲养7天后随机分为7组：正常对照组(C组)、 I组)、 温燥模型I组(wI组)、温燥模型Ⅱ组(wⅡ组)、常燥模型I组(Q 常燥模型Ⅱ组(QⅡ组)、凉燥模型I组(LI组)、凉燥模型Ⅱ组(LⅡ组)， I、L W 置人工气候箱内进行造模。c、wI、Q I组小鼠于第7日上午， Ⅱ、QⅡ、LⅡ组小鼠于第13日上午按实验要求取材，取材前4小时禁水 禁食。 (二)指标检测 1．小鼠一般情况观察 观察小鼠的神态、活动情况、皮毛色泽及有无脱落，饮食状况及粪便 Il 物理性状变化。 2．小鼠肺组织结构观察 采用苏木素伊红(HE)染色法。 采用定量ELISA试剂盒检测。 4．肺组织Muc5acmRNA和AQP5mRNA表达的测定