转基因育种的应用和外源基因整合种一谭文琛分析.ppt

转基因动物 转基因植物 转基因育种的应用和外源基因的整合  种一谭文琛 国外转基因植物研究与现状 自从20世纪70年代重组DNA技术创建到1983年第一株转基因烟草获得以来，至今已有3个科120种植物转基因获得成功。目前，各国已累计批准23种转基因作物商业化应用，种植面积在1000000平方千米以上的作物包括大豆、玉米、棉花和油菜，涉及100多个转化体，13类目标性状，包括抗虫、抗除草剂、抗病、育性改变、品质改良等。从1996-2007年转基因作物累计种植面积达第一次达到690000000平方千米，以67倍的空前速度增长，成为近代史上发展最快的生物技术。 抗除草剂方面2007和2008年种植面积最大的五个国家是美国（占全球一半）、阿根廷、巴西、加拿大、印度 2007年在美国40%的转基因玉米用来生产乙醇 2007发展中国家种植面积占全球转基因作物种植面积的43%。5个主要发展中国家致力于转基因作物，范围涉及亚洲的印度和中国、拉丁美洲的阿根廷巴西、非洲的南非，代表了全球人口40%的26亿人口。 我国转基因作物研究与利用概况 我国是世界上转基因作物第一个商品化种植的国家。国内自行培育的双价转基因烟草的抗虫性达到60%，产量比对照增加15%,产值增加20%，1992年每亩增产200元，遗憾的是由于市场的原因现已不推广。中国转基因作物研究始于20世纪80年代，1986年启动的“863”计划起了关键性的导向、带动和辐射作用。自2001年《农业转基因生物安全管理条例》颁布以来，我国农业部共受理了192家国内外研究单位的安全评价申请1525项，批准转基因生物中间试验456项，环境释放211项，生产性试验181项，发放安全证书424项，涉及了包括水稻、玉米、小麦、大豆、油菜、棉花在内的40多种受体作物，以及包括抗病虫、耐除草剂等10余种性状的转基因生物，促进了农业生物技术研究与产业的健康发展。同时批准发放转基因大豆、油菜、棉花、玉米18个品种的进口加工原料用安全证书，规范了转基因农产品进出口秩序。 1997年国产抗虫棉花进入商业化应用以来，我国已成为继美国之后第二个拥有抗虫棉自主知识产权的国家，培育出了系列的抗虫棉新品种，达到国际领先水平。据统计，每公顷抗虫棉可是化学农药用量减少约47千克，生产成本降低20%~23%。年经济效益达50亿元以上。转基因抗虫棉已对我国农业可持续发展做出了巨大的贡献。 中国转基因抗虫水稻也已培育成功，与常规品种相比，转基因抗虫水稻有显著的产量优势，因此，如果在生产上大规模加以利用，可以产生显著的经济效益和社会效益。 那么， 如何获得转基因作物 目的基因的获取 1.通过建立基因文库，然后从基因文库中筛选并扩增目的基因； 2.利用分子标记进行基因定位克隆； 3.应用PCR技术扩增分离特定的DNA； 4.利用转位因子，分离目的基因。 载体系统及其制造 理想的用作克隆载体的质粒必须满足如下条件： 1.具有复制起点。 2.具有抗菌素抗性基因。 3.具有若干限制酶单一识别位点，以满足基因克隆的需要，插入适当大小的DNA片段之后，不影响智力DNA的复制。 4.具有较小的分子质量和较高的拷贝数。 重组DNA的制备 DNA体外重组技术，主要依赖于限制性内切核酸酶和DNA连接反应，考虑以下三个因素： 1.实验步骤要尽可能简单易行； 2.连接形成的“接点”序列应能被一定的限制性内切核酸酶重新切割以便回收插入的外源DNA片段； 3.对转录和翻译过程中密码结构的阅读不发生干扰。 植物的遗传转化 (一)植物组织和愈伤组织的遗传转化 1.土壤农杆菌转化技术 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。 2.利用基因枪进行基因转化 基因枪介导转化法（Gene gun mediated transformation）利用火药爆炸、高压气体加速、低压气体加速（这一加速设备被称为基因枪），将包裹了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入完整的植物或动物组织和细胞中。通过火药爆炸、高压气体加速传输方式对植物细胞进行轰击，通过细胞和组织培养技术，可再生出植株，选出其中转基因阳性植株