溴酸钾对Hep2细胞的遗传毒性及氧化应激机制的研究.pdf

溴酸钾对HepG2细胞的遗传毒性 及氧化应激机制的研究 硕士生姓名：张 毅 指导教师：仲来福 教授 专业名称：劳动卫生与环境卫生学 摘 要 bromate，PB)是饮用水臭氧消毒的副产 前言：溴酸钾(potassium 物，在食品工业中曾广泛用作面粉处理剂，用来改善面粉的品质。因此， PB主要通过饮食而被人体摄入。鉴于研究发现PB存在致突变性和致癌 性，我国和其他一些国家已禁止将其作为面粉处理剂继续应用。2007年 7月1日实施的《生活饮用水卫生标准》中，我国首次将溴酸盐纳入饮 用水国家标准，规定在使用臭氧消毒时，水质溴酸盐含量的限值为0．01 毫克／升，与世界卫生组织的制定标准一致。 forResearchon 国际癌症研究机构(International Cancer， Agency 987年就将PB归为2B类致癌物。PB是一种可增加人类患 IARC)早在l 癌症风险的化学物。此外，有研究发现显示PB具有遗传毒性，但有关 遗传毒性机制的研究不多。研究表明，PB可导致细胞中活性氧类(ROS) 生成增多，也能引起细胞内主要的抗氧化物质——还原型谷胱甘肽 (GSH)含量降低。另外，有研究发现，溶酶体膜稳定性改变和线粒体 膜电位变化也与遗传毒性机制有关。因此，我们研究了PB遗传毒性与 细胞内ROS与GSH含量以及溶酶体线粒体的关系，旨在探讨PB遗传毒 性的氧化应激机制。PB经消化道途径进入体内，肝脏作为PB代谢的最 细胞保留了人类正常肝实质细胞的许多功能，还保留了生物转化I相酶 和II相酶的活性，被认为是检测外来化合物遗传毒性的理想细胞系。 机制，为进一步评估PB对人类的危害提供实验资料。 遗传毒性。为探讨其可能的遗传毒性机制，以27，7 7一二氢二氯荧光 GSH水平对PB所致的DNA与染色体损伤效应的影响，用吖啶橙 (Acridine 1 orange)和罗丹明l23(Rhodamine23)分别测定细胞内溶 酶体膜稳定性和线粒体膜电位的改变水平，以免疫组化方法检测细胞内 v1 8．羟基脱氧鸟苷(8．OHdG)的表达水平。实验结果用SPSS1．5统计 软件包进行统计分析。 mM—l2．5 结果：1．56 h后，引起细 mM的PB作用于HepG2细胞l 胞DNA链断裂，形成彗星样脱尾，尾长、尾DNA含量及尾距均明显大 于未用PB处理的细胞。而相同剂量梯度下的PB接触细胞40min，与未 用PB处理细胞比较，未见有统计学意义的差别。1 2．5“M一50“M的HT 预处理后，12．5 h，不同剂量HT干预组形 mM的PB接触HepG2细胞1 成的彗星样脱尾，尾长、尾DNA含量及尾距均明显小于未用HT处理的 2mM—l 细胞。0．1 h可引起细胞微核率 mM的PB作用于HepG2细胞24 显著升高。采用l50 h，以耗竭细胞 gM的BSO预处