燕窝糖蛋白酶联疫检测方法的研究.pdf

摘 要 以燕窝中特有成分．燕窝糖蛋白为检测目标，建立了双抗夹心酶联免疫方法 (锄zynle．1inked 效方法。 抗原是影响抗体特异性和效价的重要因素。燕窝经60℃水浴提取、醇析得糖蛋 S．200凝胶过滤层析 白粗品，再经DEAE．Sept嫩0∞f如tnow离子交换层析、Seph∞ryl 分离纯化得到了成分相对均一的燕窝特征组分燕窝糖蛋白，经SDS．PAGE凝胶电泳测 定其分子量约为60 kD，且为单一条带，再次说明成分相对均一；通过p消去反应， 证明O型糖肽键的存在，证明所得组分为糖蛋白。 以纯化的糖蛋白免疫日本大耳白兔，获得了兔抗燕窝糖蛋白抗血清，效价达到 64000，采用Proteill A．Seph锄∞4B亲和层析纯化的抗体作为第一抗体，其浓度为3．09 m酌∞L，以常用的辣根过氧化物酶m嘣；eraudiShper0)【ida∞，m冲)标记抗体得到酶标抗 体，经条件优化建立了抗体．抗原．酶标抗体的双抗夹心ELISA方法，其检测限为0．031 “卧nL，线性范围为0．0625-2鸺／h1L。 选用常见的燕窝掺假物银耳、猪皮、淀粉、鸡卵清蛋