王刚实验六真核生物基因组DNA提取及琼脂糖凝胶电泳.ppt

二、实 验 内 容 （一）植物基因组DNA的快速提取 CTAB法的原理 CTAB (十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，并使蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离; 能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（＞0.7 mol/L NaCl）可溶，通过乙醇或异丙醇可沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。 ? 快速冷冻植物组织和轻轻操作DNA溶液（可减少DNA分解和因机械损伤而断裂）。 ? 研磨要快而彻底。 ? 振荡要轻，不使用太细的吸头，不能吸得太快（减少DNA机械损伤）。 ? 多糖、蛋白质及木本植物中的酚类物质是植物DNA 抽提中的主要污染物，要尽量使用幼嫩叶片。 ? 所得DNA应为无色或灰白色，若呈褐色则有多酚类物质污染。 ? 乙醇一定要吹干。 ●上样缓冲液： 组成：溴酚兰（在碱性液体中呈紫兰色，作指示剂） 蔗糖 甘油 ●核酸染色剂：溴化乙锭（EB） 一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光。其荧光强度与DNA含量成正比。 1. 凝胶制备 ： 用1× TAE制备0.8%琼脂糖凝胶。称适量琼脂糖加入TAE ，加热至琼脂糖全部熔化，冷却至50-60℃ 时，加入 EB 至终浓度 0.5μg/mL，倒入胶板(