电灯开关上细菌的分离与鉴定解读.docVIP

电灯开关上细菌的分离与鉴定 叶虎林 魏敬族 孙宇桐 尹拥拥 (燕山大学 环境与化学工程学院) 摘 要：据美国休斯顿大学一项调查显示，电灯开关是酒店内沾染细菌最多的物品之一。在日常生活中，电灯开关作为不可或缺的照明控制器，与人们的卫生安全有着密切关系。本实验通过对学生宿舍、食堂、教学楼和实验室四个频繁接触场所的电灯开关进行细菌的分离与鉴定，进一步了解细菌的数量和种类，从而为针对性地做好卫生防御工作提供了条件。 关键词：电灯开关；细菌；细菌培养；分离；生理生化鉴定 0 引言 怀揣对大自然微生物界的探索与求知的激情，力求得到以小见大的效果。我们小组选择了对灯开关上细菌种类进行分离与鉴定，旨在掌握微生物基础操作技术，更希望通过此实验结果使广大群众清楚他们常常忽略的细节之处及存在的健康隐患。我们利用了三周的时间进行了探索，经过取菌、提纯、生化鉴定以及最后的总结分析结果，我们的实验结果最大收益之处在于发现：一个普通的电灯开关上就可在不同的稀释梯度下通过显微镜观察到数目繁多的细菌，后期的分离与鉴定更是得到数株不同种的细菌，不同的细菌其细胞内部所进行的生化反应不同，所以对我们的影响也不同。其中不乏有利菌种。但，凡是能够影响到健康及生活节律的问题就不容小觑。例如，志贺氏菌几个就可以引发健康危机，甚至夺取生命。下面就请大家和我们一起走进细菌的世界，观察他们的生理活动以及探索不同的菌所带来的危害。 1 材料和方法 1.1材料 11.1 实验材料 平板，试管，锥形瓶，烧杯，移液管，试管架，酒精灯，电热炉，接种环，棉签，显微镜，涂布棒，报纸，棉线等。 1.1.2 培养基 牛肉膏蛋白胨培养基，淀粉培养基，石蕊牛奶培养基，糖发酵培养基（葡萄糖，乳糖，蔗糖），蛋白胨水培养基。 1.1.3 溶液和试剂 卢戈氏碘液，吕氏碱性美兰，番红染色液，草酸铵结晶紫，甲基红指示剂，NaCl，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，40%KOH，5%α-萘酚，淀粉，葡萄糖，蔗糖，乳糖，牛奶粉，石蕊，牛肉膏，蛋白胨，琼脂，乙醚和吲哚试剂等。 1.2 方法 1.2.1 培养基的制备 1)牛肉膏蛋白胨培养基 按照这个比例进行配制：牛肉膏0.6g、蛋白胨2g、NaCl 1g 琼脂3~4g、水200ml ， 配好后将pH值调到 7.0~7.2，然后121℃下灭菌20min。 2)淀粉培养基 按照这个比例进行配制：蛋白胨 2g、NaCl 1g、牛肉膏1g、可溶性淀粉0.4g、蒸馏水200ml、琼脂3~4g，配制好后在121℃下灭菌20min。 3)石蕊牛奶培养基 按照这个比例进行配制：牛奶粉 20g、石蕊0.025g、水200ml 配好后将pH值调到6.8，然后 121℃下灭菌15min。 4)蛋白胨水培养基 按照这个比例进行配制：蛋白胨5g、NaCl2.5g、蒸馏水 500ml配好后将pH值调到7.6，然后 121℃下灭菌20min。 5)糖发酵培养基 先按照(4)配制好蛋白胨水培养基100ml，然后配制1.6%的溴甲酚紫乙醇溶液0.1~0.2ml；令配制20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖）各10ml。 操作：①将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管中， 玻璃管。 ②将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121°C 灭菌20min；糖溶液112℃下灭菌30min。 ③灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%的无菌糖溶液0.5ml(按每10ml培养基中加入20%的糖溶液0.5ml，则成1%的浓度)。 配制用的试管必须洗净，避免结果混乱。倒置的小玻璃管内必须充满培养液。 1.2.2细菌的提取与培养 1)用灭菌后的棉签蘸取少量无菌水，擦拭灯开关（宿舍，食堂，实验楼，教学楼）上一定表面积的范围。 2)将取好菌的棉签置于灭菌后的装有适量无菌水的试管内，并按取菌地点贴标签。 3)用灭菌后的移液管和试管分别将原菌液稀释10倍，100倍，1000倍，10000倍，并按取菌地点和稀释倍数贴标签。 4)用灭菌后的移液管取菌液0.1mL于灭菌后的平板（牛肉膏蛋白胨培养基）表面并用灭菌后的涂布棒涂布，并按取菌地点和稀释倍数贴标签。 5)将接种后的平板置于37℃恒温培养箱中培养24~48h。 1.2.3细菌的分离与纯化 1)培养后的平板上出现多种不同形态的菌落，观察发现稀释100倍平板菌落分布情况最适合下一步实验。 2)分别用接种环在平板上挑取少量菌在灭菌后的平板（牛肉膏蛋白胨培养基）表面三段划线，并按取菌地点贴签。 3)将三段划线后的平面置于37℃恒温培养箱中培养24~48h。 4)培养后的三段划线平板出现多种不同形态菌落。 5)