第十二章 微生物学新技术在环境工程中的应用.ppt

微生物学新技术 §12-1 固定化酶和固定化微生物在环境工程中的应用 一、酶制剂剂型 * * 第十二章 微生物学新技术在环境工程中的应用 包括：遗传诱变育种、基因工程、发酵工程、酶工程、微生物制剂、生物表面活性剂等。 1、干燥粗酶制剂 将用麸曲或深层发酵的培养液除菌(或不除菌)后，与淀粉等惰性填料混合、干燥制成粗酶。 2、稀液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体等杂质后，直接加稳定剂(甘油、乙醇、氯化钠等的复合物)和防腐剂作为商品出售。 3、浓液体酶制剂 将培养液除去菌体等杂质、浓缩后再加稳定剂和防腐剂制成商品。 4、干燥粉状酶制剂 我国多数生产此种酶制剂，其制备工艺为： ①过滤培养液去菌体→浓缩→喷雾干燥→研磨→加稳定剂、惰性填料→成商品 ②过滤培养液去菌体→硫酸铵盐析或乙醇沉淀→干燥→研磨→加稳定剂、惰性填料→成商品 5、结晶酶 6、固定化酶 将酶和酶菌体固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，可较长时间使用。 二、酶的提取 1、预处理 不同的酶有不同的预处理方法： ①胞外酶存在培养液中，只需将菌体过滤或离心除去，所得的清液即为粗酶液。如果是固态发酵麸曲，用水或缓冲液浸泡，再离心或过滤去菌体及杂物后所得清液即为粗酶液。粗酶液再经提纯即为酶精制品。 ②对胞内酶则要破碎细胞壁和质膜，制成无细胞提取液再提纯。 细胞破碎方法有：干燥法(空气干燥、真空冷冻干燥、溶剂脱水干燥)、机械法(研磨法、机械捣碎)、超声波破碎、反复冷冻法、自溶法、溶菌酶法。 2、酶的提取 (1)水溶液提取法：用稀的盐溶液、缓冲液或水提取。 (2)?表面活性剂提取法 表面活性剂有：天然的胆酸盐、磷脂，合成的十二烷基硫(磺)酸钠(SDS,阴离子型)、二乙氨基十六烷基溴(阳离子型)、非离子型的有吐温(Tween)及三通－X(triton-X)。 (3) 丁醇提取法 三、酶的纯化 1、浓缩 2、去杂质 3、纯化 4、结晶 pH沉淀法、利用蛋白质热变性的温度差异、蛋白沉淀剂法。 盐析法；有机溶剂沉淀法；层析法：吸附层析法、离子交换层析法、分子筛过滤层析(凝胶过滤层析)法、等电点沉淀法。 当酶达到一定纯度后，在适当的温度、pH条件下，逐渐加入硫酸铵溶液中，酶可慢慢析出结晶，也可加入某些有机溶剂析出结晶。 葡萄糖凝胶－分子筛浓缩法、聚乙二醇(PEG)浓缩法、超滤膜浓缩法、冰冻法、盐析或乙醇沉淀后分离。 四、固定化酶和固定化微生物的固定化方法 (一) 固定化酶与固定化微生物 1、固定化酶 从筛选、培育获得的优良菌种体中提取活性极高的酶，再用包埋法(或交联法、载体结合法、逆胶束酶反应系统)等方法将酶固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，即～。 2、固定化微生物 利用与固定化酶相同的方法将酶活力强的微生物体固定在载体上，即成～。分死细胞固定化和生长细胞固定化2种。 微生物本身是多酶体系的固定化载体，将整个细胞固定化更有利于保持其原有活性，甚至可提高活性。 3、固定化酶与固定化微生物的特性 固定化酶与固定化微生物普遍比未固定化的微生物性能好，稳定、降解有机物能力强、耐毒、抗杂菌，耐冲击负荷。 (二) 固定化酶与固定化微生物的固定方法 固定化方法有载体结合法、交联法、包埋法和逆胶束酶反应系统。 1、载体结合法 以共价结合、离子结合和物理吸附等将酶固定在非水溶性载体上。载体有葡聚糖、活性炭、胶原、琼脂糖、多孔玻璃珠、高岭土、硅胶、氧化铝、羧甲基纤维素等。 2、交联法 将酶与有两个或两个以上官能团的试剂反应形成共价键的固定方法。交联剂有：戊二醛、双重氮联苯胺和六甲撑二异氰酸酯。 3、包埋法 将酶包埋在凝胶微小格子(格子型)中，或将酶包裹在半透性的聚合物膜内(微型胶囊型)的固定方法。格子型的包埋材料：聚丙烯酰胺(PACAM)凝胶、聚乙烯醇(PVA)、琼脂、硅胶等。微胶囊型的包埋材料：尼龙、乙基纤维素和硝酸纤维素。 4、逆胶束酶反应系统 表面活性剂的两性分子在有机溶剂中自发形成聚集体，其亲水性一端连接成逆胶束的极性核，水分子插入核中，其疏水性的一端进入主体有机溶剂中，酶分子溶于逆胶束中，组成～。 五、固定化酶和固定化微生物在环境工程中的应用 1、污染物处理 应用固定化酶或固定化细胞可以组成快速、高效、连续运行的污水处理系统。日本将α－淀粉酶固定后用于处理淀粉废水和造纸废水，效果较好。美国有人将多酚氧化酶固定后用于含酚废水处理，效果显著。德国将9种降解对硫磷农药的酶固定到多孔玻璃珠及硅胶珠上，再制成酶柱处理对硫磷废水，获得95％以上的去除效果，连续运行2个多月酶活性基本不变。有人将白腐菌固定在海藻酸钙上对造纸黑液进行处理，脱色率高达80％以上