Notch1和Notch2对胰腺癌HPAC细胞中Hes家族靶基因的不同调控作用.pdfVIP

2015正 4月 首 都 医 科 大 学 学 报 Apr．2015 第 36卷 第2期 JournalofCapital Medical University Vo1．36 No．2 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2015．02．015] ·基 础 研 究 · Notchl和Notch2对胰腺癌HPAC细胞中Hes家族靶 基因的不同调控作用 李炳秋 张玉祥 (首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，北京 100069) 【摘要】 目的 研究Notchl、Notch2受体对胰腺癌HPAC细胞Notch信号通路下游Hes家族靶基因的影响。方法 运用 siRNA 干扰技术分别干扰 HPAC细胞中Notchl和Notch2基因，用Westernblotting法检测Notchl和Notch2的干扰效率 ，用real—timePCR 检测 siRNA干扰后Notch下游靶基因Hes1、Hes2、Hes4和Hes6的mRNA表达水平；同时用 Westernblotting法检测 Hesl的蛋白表 达变化。结果 与空白对照组 (1．000+0．019)和 siRNA对照组 (0．908±0．039)相 比，Notchl—siRNA转染组 (0．124~0．005)的 Notchl蛋白表达量显著降低。Notch1敲减降低了Hes1和Hes6的mRNA表达，Hesl与空白对照组和siRNA对照组相 比，差异有 统计学意义(P0．05)；Hes6与空白对照组和 siRNA对照组相比，差异有统计学意义 (P0．05)，对Hes2和Hes4的mRNA则没有 影响。／／es2与空白对照组 siRNA对照组相比，差异无统计学意义 (P0．05)；Hes4与空白对照组和 siRNA对照组相比，差异无统 计学意义 (PO．05)。与空 白对照组 (1．000~0．015)和 siRNA对照组 (0．990~0．017)相 比Notch2-siRNA转染组 (0．350~0．009) 的Notch2蛋白表达量显著降低。Notch2敲减降低了Hesl的mRNA表达，Hesl与空白对照组和siRNA对照组相比，差异有统计 学意义 (PO．05)，而对Hes2、Hes4和Hes6的表达没有影响，Hes2与空 白对照组和 siRNA对照组相 比，差异无统计学意义 (P 0．05)；Hes4与空白对照组和 siRNA对照组相比，差异无统计学意义 (P0．05)；Hes6与空白对照组和 siRNA对照组相 比，差异无 统计学意义 (PO．05)。Notch1和Notch2下调均不能引起Hesl蛋白水平变化。结论 HPAC细胞中Notch1的靶基因是 Hesl和 Hes6，而Notch2的靶基因是Hesl，提示不同Notch家族成员调控的靶基因有交叉但是不同。 【关键词】 Notch1；Notch2；siRNA；Hes家族基因；胰腺癌 【中图分类号】 R329．2 EffectofsilencingNotchlandNotch2ontheexpression ofHesfamilygenes inHPAC pancreaticcancercells LiBingqiu，ZhangYuxiang (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，SchoolofBasicMedicalSciences，CapitalMedicalUniversity， Beijing100069，China) A【bstract】 Objective ToexploretheeffectofsilencingNotchlandNotch2onthegeneexpressionofHesfamilytargetgenesin HPACpancreaticcancercells．M ethods Notch1一siRNAandNotch2-siRNA weretransfectedasaliposomalformulationintoHPACcells， respectively，theproteinexpressionofNotch1andNotch2weredetectedbyWeste