喹乙醇单克隆抗体的研制及其ELISA方法的建立.pdfVIP

核 农 学 报 文章编号 喹乙醇单克隆抗体的研制及其 方法的建立 桑永玉 金仁耀 浙江工商大学水产品加工研究所浙江 杭州 浙江省水产品加工技术研究联合 重点实验室浙江 杭州 摘 要喹乙醇属喹噁啉类药物因其抗菌可提高蛋白同化作用而常被用作促生长剂但研究发现喹乙 醇过量使用会蓄积毒性可致畸致突变因此为了加强喹乙醇的 量安全监控需开展其快速检技术研 究 本试验中喹乙醇半抗原 采用琥珀酸酐法进行合成 谱法鉴定喹乙醇人工抗原 采用活化酯法制备电泳和紫外扫描进行结果鉴定 鼠免 疫后取其脾细胞与 细胞融合经筛选克隆最终得到 株能稳定分泌抗喹乙醇单抗的杂交瘤细胞 株 经鉴定 的抗体类型及亚类均为 轻链为 链制备腹水后测定其间接 效价达 以上制备的单克隆抗体特异性高与喹乙醇结构类似物均无交叉反应 用此单抗建立的 方法表明检测灵敏度 值为 检测饲料中喹乙醇的平均添加回收率为 准确性较好 喹乙醇单克隆抗体的研制和间接竞争 分析方法的建立为下一步饲料中 喹乙醇试剂盒的开发奠定了基础 关键词喹乙醇单克隆抗体竞争饲料 喹乙醇 是由德国公司研 为必要 制开发的一种抗菌促生长剂曾广泛应用于水产养殖 关于喹乙醇的残留检测方法 目前国内外现有的 业一度被称为 水产瘦肉精 然而随着研究的 研究报道主要集中在仪器分析和免疫分析法等方 深入喹乙醇的毒性进一步被明确不规范用药会有明 面 免疫分析较仪器分析具有高特异性高灵敏 显的遗传毒性和蓄积毒性 因此国内外先后制定了 度高通量操作简单检测成本低可现场操作等优 严格的使用规范和残留限量标准 如日本规定在动物 点已广泛应用于小分子药物残留检测中 本研 组织和内脏 中的最大残 留限量 究通过杂交瘤技术筛选制备抗喹乙醇的高特异性和 为 美国和欧盟禁止使用喹 灵敏度单克隆抗体并在此基础上建立了饲料中快速 乙醇我国农业部在 年发布的第 号公告 饲 检测喹乙醇的竞争 方法为下一步开发饲料及 料药物添加剂使用规范 中规定饲料中的添加量不得 其他动物制品中的喹乙醇 试剂盒奠定基础 高于 同时规定禁止在鱼禽及体重超过 猪的养殖过程中使用 年农业部发布第 材料与 法 号公告 动物性食品中兽药最高残留限量 规定在 猪肝和猪肉中的 分别为 和 试验材料 然而喹乙醇价格便宜抗菌促生长效果好违 主要试剂 喹乙醇氯霉素青霉素