类芽孢杆菌Bg1抗真菌蛋白的分离及其特性分析.pdfVIP

核 农 学 报　 ２０１４，２８（１）：００２９～００３５ ２９ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号：１０００⁃８５５１（２０１４）１⁃００２９⁃０７ 类芽孢杆菌 Ｂｇ１抗真菌蛋白的分离及其特性分析 １，２ ２ １ １ ２ 叶慧敏 　 张殿朋　 刘　 霞　 于　 莉　 刘伟成 １ ２ （ 广东海洋大学农学院，广东 湛江　 ５２４０８８； 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所，北京　 １０００９７） 摘　 要：为了明确类芽孢杆菌（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．）Ｂｇ１的主要抗真菌物质及其特性，本文利用抑菌圈法测 定了Ｂｇ１抗菌蛋白在各种处理条件下抑菌活性的稳定性；通过６０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ⁃ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０ 离 子交换层析及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００凝胶过滤层析进行了抗菌蛋白的分离纯化，以ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ进行了其纯度检 测。 结果表明，２８～１００℃处理３０ ｍｉｎ、４℃存放５５ ｄ及在ｐＨ值３～７ 范围内菌株Ｂｇ１抗菌蛋白抑菌活 性均无显著性变化，但ｐＨ值８显著影响其抑菌活性，蛋白酶处理则使其抑菌活性完全丧失；纯化后所 得抗菌蛋白分子量约１０ ＫＤ。 据此可知，类芽孢杆菌Ｂｇ１主要抗菌活性物质为低分子量蛋白，其对热和 酸性条件及贮存时间稳定性好，具有进一步开发应用的潜能。 关键词：类芽孢杆菌；抗真菌蛋白；分离纯化；稳定性分析 ＤＯＩ：１０：１１８６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１．２０１４．０１．００２９ 　 　 尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）是重要的植物 （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、欧文 氏菌 （Ｅｒｗｉｎｉａ）、黄单胞菌 维管束系统性侵染的土传病害病原菌，其多个专化型 （Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ） 等细菌，念珠菌 （Ｃａｎｄｉｄａ）、木霉 分别能引起甘蓝、香蕉、番茄和瓜类枯萎病，在生产上 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）等真菌，以及链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）等放 的危害十分严重［１－５］。 如尖孢镰刀菌粘团专化型（Ｆ． 线菌均已成功应用于植物病害生物防治［１１－１２］。 类芽 ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｏｎｇｌｕｔｉｎａｎｓ）引起的甘蓝枯萎病近年 孢杆菌（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）由于能产生丰富的抗菌物 ［１３］ 来在我国山西、河北、北京等甘蓝产区迅速蔓延，造成 质，是防治植物病害理想的生防材料 。 但是，利用 甘蓝产量的急速下降，已成为甘蓝生产的重要限制因 类芽孢杆菌来控制甘蓝和香蕉镰刀菌枯萎病的系统研 素［６－７］ ；尖孢镰刀菌古巴专化型（Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． 究却鲜为报道。 ［２］ ｃｕｂｅｎｓｅ）引起的香蕉枯萎病是香蕉的毁灭性病害 ， 类芽孢杆菌菌株Ｂｇ１是从柬埔寨磅清扬郊区杂草 已经蔓延到全世界，在国内以广东、海南等省较为严 地土样中分离获得的拮抗菌，该菌株及其培养滤液对 ［８］ 重，极大地阻碍了香蕉产业的发展 。 对镰刀菌枯萎 香蕉枯萎病菌和甘蓝枯萎病菌均具有很好的拮抗活