易错PCR研究进展及应用.pdfVIP

核农学报摇 圆园员猿袁圆苑渊缘冤院园远园苑耀园远员圆 远园苑 摇 允燥怎则灶葬造燥枣晕怎糟造藻葬则粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻泽 文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园缘鄄园远园苑鄄园远 易错孕悦砸研究进展及应用 员袁圆 员 员 圆 员 高义平 摇 赵摇 和摇 吕孟雨摇 杨学举摇 王海波 渊员河北省农林科学院遗传生理研究所辕 河北省植物转基因中心袁石家庄摇 园缘园园缘员曰 圆 河北农业大学农学院袁保定摇 园苑员园园园冤 摘摇 要院易错孕悦砸是目前最简单尧有效的一种基因体外随机诱变技术袁是农业尧工业尧生物制药等领域获 得优异基因的重要手段遥 本文综述了易错孕悦砸 的基本原理尧方法尧发展历程袁以及该技术的最新研究成 果尧成功应用领域袁并提出了目前存在的问题和可能解决途径遥 关键词院易错孕悦砸曰随机诱变曰研究进展 摇 摇 孕悦砸是一种阅晕粤片段体外复制技术袁但常有一定 复制过程中发生碱基代换的诸多影响因素进行研究袁 的碱基错配发生袁一般错配率为 员园原远 原缘 耀员园 遥 碱基错 以提高基因体外合成的精确性曰同时袁还有很多研究者 配虽然降低了 阅晕粤 序列复制的保真性袁但对获得新 在积极寻求能够诱导基因产生各种可能变异的有效方 阅晕粤序列提供了一种可利用的突破口遥 于是袁便出现 法袁来模仿自然界核酸尧蛋白质的进化过程遥 蕴藻怎灶早 了易错 孕悦砸 技术渊耘则则燥则鄄责则燥灶藻 孕悦砸袁藻责孕悦砸冤遥 易错 等咱员暂受以上两个不同研究方向的启示袁提出了基因在 孕悦砸是通过改变孕悦砸条件袁提高扩增产物的碱基错配 易错孕悦砸条件下产生变异袁可以构建突变体库的观 率袁从而获得与原来不同的阅晕粤序列或基因遥 点袁并建立了易错 孕悦砸 技术体系遥 该体系于 员怨怨圆年 易错孕悦砸作为一种简便尧有效地获得 阅晕粤序列 经悦葬凿憎藻造造和允燥赠糟藻咱圆暂进一步发展得到了完善袁目前广 变异的技术袁主要是针对特定的基因袁这在遗传和基因 泛应用的易错孕悦砸技术多是参照他们的做法遥 改良研究中具有巨大的应用前景袁但是目前尚无系统 员郾圆摇 易错孕悦砸 的基本原理 的归纳总结遥 为此袁本文综述了易错 孕悦砸 的概念尧原 员郾圆郾员摇 碱基的异构为错配提供了可能摇 组成阅晕粤 的 理尧方法尧研究进展尧应用情况以及存在的问题袁以期为 源种碱基都有互变异构体存在袁其中鸟嘌呤渊郧冤尧胞嘧 基因体外诱变工作者提供参考遥 啶渊悦冤和胸腺嘧啶渊栽冤猿种含氧碱基有酮式和烯醇式 两种互变异构体袁腺嘌呤渊粤冤和胸腺嘧啶两种含氮碱 员摇 易错孕悦砸 的概念和基本原理 基有胺式尧亚胺式两种互变异构体遥 郧尧悦和栽 主要以 酮式结构存在袁烯醇式结构的比率极低袁粤和栽两种含 员郾员摇 易错孕悦砸 的概念 氮碱基上的氮原子主要以氨基渊晕匀圆 冤状态存在袁以亚 易错孕悦砸袁意为易错条件下的 孕悦砸袁即容易使复 胺基渊晕匀冤状态存在的比率极低咱猿暂遥 不同同分异构体 制出的 阅晕粤 序列出现错误的 孕悦砸 技术袁又称错配 之间氢原子位置的不同袁及同一位置电子云偏离方向 孕悦砸或倾向错误 孕悦砸袁是指通过利用低保真度 栽葬择 的不同袁可使得碱基的配对形式发生改变袁这样在复制 阅晕粤聚合酶和改变孕悦砸反应条件袁降低阅晕粤复制的 后的子链上就可能出现错配遥 例如当胸