第七章酶非水相催化详解.pptVIP

第七章 酶非水相催化 二、水对有机介质中酶催化的影响 水在酶催化反应中发挥着双重作用: 一方面,水分子直接或间接地通过氢键疏水键及范德华力等非共价键相互作用来维持酶的催化活性所必需的构象,与酶分子紧密结合的一层左右的水分子对酶的催化活性是至关重要的,称之为必需水,不同酶与必需水结合的紧密程度及所结合的必需水数量是不同的; 第五节 酶非水相催化的应用 脂肪酶-位置选择性酯化反应 脂肪酶-消旋化合物选择性酯化 脂肪酶-消旋化合物的拆分 第三节 酶在有机介质中的催化特性 有机溶剂的存在,改变了疏水相互作用的精细平衡,从而影响到酶的结合部位. 有机溶剂会改变底物存在状态. 结果影响酶的稳定性和酶的底物特异性,立体选择性,区域选择性和化学键选择性. 一、底物专一性 有机介质中酶活性中心结合部位与底物的结合状态发生改变,致使酶的底物特异性发生改变; 水溶液中底物与酶活性中心结合靠疏水作用; 有机介质中有机剂与底物的疏水作用更强; ①N-乙酰-L丝氨酸乙酯 ②N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯 疏水性: ②﹥① 介质 水 辛烷 蛋白酶 ②﹥① ①﹥② 水解速度 底物 底物专一性(续) 不同的有机介质，酶的底物专一性也不一样； 极性较强的有机溶剂中,疏水性较强的底物易反应; 极性较弱的有机溶剂中,疏水性较弱的底物易反应; ①N-乙酰-L丝氨酸乙酯 ②N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯 疏水性: ②﹥① 二氯甲烷 吡啶 枯草杆菌蛋白酶 ①﹥② + 丙醇 (极性较强) 底物 介质 反应速度 ②﹥① 二、对映体选择性（enantioselectivity) 又称立体选择性或立体异构专一性，是酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力大小的指标； 立体选择系数越大，酶催化的对映体选择性越强 立体选择系数： 有机溶剂中酶对底物的对映体选择性由于介质的亲(疏)水性的变化而发生改变。 酶在水溶液中立体选择性强，疏水性强的有机溶剂中的酶的立体选择性差。 这种选择性是由底物的两种对映体把水分子从酶分子疏水结合位置换出来的能力不同； 介质的疏水性加大，L型底物置换水的过程在热力学上不利。 原因 溶剂的几何形状也影响酶的对映体选择性，如Ottolina报道一些脂肪酶、蛋白酶在（R）-香芹酮及（S）-香芹酮中立体选择性不同； 对映体选择性意义： 蛋白酶在水溶液中对L-氨基酸起作用，而在有机介质中可用D-氨基酸为底物合成手性药物，有重要应用。 三、区域选择性（regioselectivity） 酶能够选择性地催化底物分子中某个区域的基团优先发生反应；用区域选择系数Krs的大小衡量。 与立体选择系数相似，用1、2代替构型； 反应的位置选择因子： K1，2=（kcat/Km)1/ （kcat/Km)2 例： 1,4-二丁酰基-2-辛基苯 丁醇 脂肪酶 转脂反应 + 甲苯 乙腈 K4，1 2 0.5 四、键选择性（chemoselectivity) 即同一个底物分子中有2种以上化学键可与酶反应，酶对其一优先反应； 6-氨基-1-己醇 黑曲霉脂肪酶 毛霉脂肪酶 羟基酰化 氨基酰化 占优 意义：可在不需基团保护下合成氨基醇脂； 五、 热力学稳定性 有机溶剂中酶的热稳定性和储存稳定性都比水溶液中高；有机溶剂中酶的热稳定性还与介质中水含量有关； 原因：可能是有机介质中缺少引起酶变性的水分子； Klibanov和Volkin认为：由于有机溶剂中缺少使酶热失活的水分子，由水引起的蛋白质热失活的全过程难以进行。 六.pH值特性 有机溶剂中的酶能够“记忆”在冷冻干燥或丙酮沉淀前所在缓冲液中的PH，pH记忆，pH印记; 现象：脂肪酶催化三丁酸甘油与正庚醇的转酯反应，酶的反应速度与其冷冻干燥前水溶液的的PH密切相关，反应的最适PH接近于水溶液中的最适PH 原因：在有机溶剂中酶分子表面的必需水只要在特定的PH和离子强度下，酶分子活性中心周围的基因才能处于最佳的离子化状态 检测：根据缓冲液中磷原子的核磁共振谱的变化核利用分子探针技术，可以检测酶从缓冲液中冷冻干燥或有机溶剂沉淀后，转入吸水有机溶剂中的PH 在有机介质中酶所处的pH环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用的缓冲液pH值相同，称为pH-imprinting; 当酶分子从水溶液转移到有机介质时，原有的解离状态不变，被保持在有机介质中； 有机介质中酶催化反应的最适ph通常与在水溶液的pH接近； 但有些有机溶剂中酶的最PH与水溶液中相差较大，还与缓冲液种类和离子强度有关; 可用有机相缓冲液(疏水性酸与对应盐或疏水性碱与对应盐）控制酶的解离状态，消除酶pH印记特性的影响； 第四节 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 酶在有机介质中的催化反应受各种因素影响， 主要应控制的条件有: 酶的种类和浓度 底物的种类和浓度 有机溶剂