细胞生物学第二章+研究方法.ppt

第一节 显微镜技术 光学显微镜 : 观察显微结构 （light microscope) 显微镜 电子显微镜 : 观察亚微结构 (electron microscope) 一、显微镜技术 (一)普通光学显微镜最大分辨率是0.2微米：  λ=光源波长，可见光0.5um N=介质折射率,空气为1,油为1.5 θ=物镜镜口张角的半角 不同光线的波长 （三） 荧光显微镜 通过致密部分(如细胞核),速度慢通过疏松部位(如细胞质),速度快 电镜与光镜的比较 三.细胞组分的分级分离 分离不同类型细胞 大小 密度 形状 小 轻 不规则 大 重 圆形 差速离心：利用颗粒大小的不同 三 细胞培养 一、细胞培养 从机体中取出组织或细胞，模拟体内的生理环境，使之能够继续生存的一种方法。 二、分类 原代培养(primary culture):直接从生物体获取 细胞进行培养。 传代培养(secondary culture)：将原代培养的细 胞以定比例扩大培养。 细胞系(cell line) ：原代培养细胞成功传代即为 细胞系。 细胞株（cell strain） ：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 三.细胞培养的不同阶段 原代培养(primary culture) 传代培养(secondary culture) 二、细胞融合（细胞杂交） 1.概念：在自发或人工诱导下，相同或不同基因型细胞之间相互融合的过程。 2.诱导因子：生物：仙台病毒　 化学：聚乙二醇 物理：电脉冲 3.分类： 异核体：不同基因的细胞核融合 同核体：相同基因的细胞核融合 小 结 1.掌握分辨率的概念 2.显微镜技术（掌握各种显微镜用途） 3.细胞培养概念、分类 4.细胞融合概念、诱导因子、分类 * 第二章.细胞生物学研究方法 人眼的分辨率：100 ?m 典型的动物细胞：10-20 ?m 一般的细菌和线粒体：0.5 ?m 思考：如何提高显微镜的分辨能力？ 名 称 波 长 (nm) 可见光 760 - 390 紫外光 390 - 13 X 射线 13 - 0.05 γ射线 1 - 0.005 电子束 : 100V 0.123 10,000V 0.0122 100,000V 0.00387 （二）普通光镜的成像原理 普通显微镜结构示意图 普通显微镜光路示意图 以紫外线为光源，照射被检物体发出能观察到的荧光。 荧光显微镜显示同一细胞中的多种结构成分 细胞核 内质网 细胞骨架 （四）相差显微镜 相位差 (光程差) 振幅差 (明暗差) 相差显微镜 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 倒置相差显微镜 载物台的上方： 光源 长焦距聚光器 载物台的下方： 物镜 应用：直接对培养的 细胞进行观察 体外培养的细胞　 (a)：正在分裂生长的Hela 细胞 (b)：CHO单层细胞的培养 用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。 类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。 (五)激光共聚焦显微镜 二、电子显微镜 1.透射电子显微镜 分辨率= 0.1 nm 2.扫描电子显微镜--标本表面的三维结构 显示细胞表面三维立体结构 显示细胞断面三维立体结构 观察膜内部结构 利用样品对光的吸收形成