tDNA鉴定.ppt

* * 遗传学实验 模式植物拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 * 二、实验目的 提取植物基因组DNA的方法 PCR操作方法 琼脂糖凝胶分离核酸方法 * 三、实验原理 1. Ti质粒和T-DNA： Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒，该质粒上有一段特殊的DNA区段， 当农杆菌侵染植物细胞时，该DNA区段能自发转移进植物细胞， 并插入植物染色体DNA中。所以Ti质粒上的这一段能转移的DNA被叫做T-DNA。 * 将Ti质粒进行改造，将感兴趣的基因放进T-DNA区段中， 通过农杆菌侵染植物细胞，实现外源基因对植物的遗传转化。 * 2. T-DNA插入基因内部导致基因突变 T-DNA插入到植物染色体上的什么位置，是随机的。如果T-DNA插入进某个功能基因的内部，特别是插入到外显子区，将造成基因功能的丧失。所以利用农杆菌Ti质粒转化植物细胞，是获得植物突变体的一种重要方法。 * 3. 用PCR方法鉴定T-DNA插入纯合突变体 农杆菌Ti质粒转化植物细胞后，在获得的后代分离群体中，有T-DNA插入的纯合突变体，杂合突变体，和野生型。 在突变体研究中，需要的材料是纯合突变体，所以必须从分离群体中将纯合突变体鉴定出来。 * 利用三个引物做PCR鉴定纯合突变体 LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物 BP是T-DNA区段上的引物 * PCR由变性--退火--延伸三个