可溶性CD80子免疫放射分析方法的建立及应用研究.pdfVIP

可溶性CD$0分子免疫放射分析方法的建立及应用研究 中文摘要 可溶性CD80分子免疫放射分析方法的建立及应用研究 中文摘要 目的：建立可溶性共刺激分子CD80的免疫放射分析方法(IRMA)，探讨其临床 应用。 的用量、抗体的用量、125I的活度及反应时间，摸索在不同条件下标记的效果，寻找一 G．50分离纯化，三氯醋酸(TC^)法测定其标记率 最佳标记条件；标记产物用Sephadex 培养箱中反应，测定标记物的免疫活性；将标记物分别加入到生理盐水、血清及0．05M 法制各单克隆抗体4E5的固相包被管，用不同浓度的抗体、不同pH的缓冲液包被试 管，并选择适宜的反应温度及时间、最佳封闭时间等，以确定最佳包被条件；将制备 与抗原的免疫结合，观察其稳定性。③建立双位点夹心可溶性CD80分子的IRMA，检 测各类自身免疫性疾病及肿瘤患者血清中的CD80含量并与正常对照组比较。 结果： 22．2 加入Nal25I 与Daudi细胞的结合率随细胞数的增加而增加，当细胞数为1x107时结合率达到最高 标记物加入到不同稀释液中后，在4C条件下，对照组及人血清组1w后、PBS组3w 固相包被管制备的最佳条件为：用0．05M7．4的磷酸盐缓冲液稀释抗体4E5至 pH 可溶性CD80分子免疫放射分析方法的建立及应用研究 中文摘要 被管在4℃条件下放置8w仍保持很好的稳定性。③建立的可溶性CD80分子IRMA， 回收率为86．64-104．05％；该方法检测的各类标本结果显示，类风湿性关节炎、甲亢、 桥本氏病、慢性肾炎、糖尿病及B细胞淋巴瘤患者血清中的CD80含量明显高于正常 结论g 本研究建立的可溶性CD80分子的免疫放射分析法，操作简便，方法学 稳定，有重要的临床应用价值。 关键词：CD80；125I标记；固相包被；免疫放射分析；应用 作 者：翟士军 指导老师：苏成海 ll 可溶性CD80分子免疫放射分析方法的建立及应用研究 英文摘要 and ofIRMATechnolo—- TheEstablishment Application ofHumanSoluble MoleculeCD80 gy Costimulatory Abstract IRMA for moleculein ective：Toestablishmethod solubleCD80 Obj analysis human剑$rulnand ltScluucaJ investigateapplication． waslabeledwithNal25I monoclonal10D9 CD80 Methods：OThe against antibody method．Severalconditionswere astheamountof u