苦参碱对宫颈癌胞JAK-STAT信号传导通路的负调控机制研究.pdfVIP

II 目录 摘 要1 ABSTRACT3 缩略词表5 前 言6 第一部分 立 题 依 据8 1 宫颈癌及治疗简介8 2 苦参碱简介及抗肿瘤作用机制9 3 JAK-STAT信号传导通路14 4课题思路、创新性分析及拟解决的问题20 第二部分 实验研究21 1 实验材料21 2 实验试剂配制22 3 实验器材的无菌处理24 4 技术路线图25 5 实验方法25 第三部分 实验结果36 1 MTT检测苦参碱对宫颈癌Hela、Siha细胞增殖活力检测结果： 36 2 Western Blotting定量检测SHP2、SOCS3、PIAS1 的蛋白表达量的影响 37 3 RT-qPCR检测SHP2、SOCS3、PIAS1 的mRNA表达量的影响39 第四部分 分析与讨论42 结语45 1 结论45 2 研究结果的意义45 3 问题与展望45 参考文献46 综述 苦参碱的抗肿瘤作用研究进展51 致 谢58 在学期间主要研究成果59 III 苦参碱对宫颈癌细胞JAK-STAT信号传导通路的负调控机制研究 摘 要 研究目的：观察苦参碱 （Matrine）对人宫颈癌Hela、Siha细胞的增殖抑制作用以 及对JAK-STAT （JanusKinase/SignalTransducersandActiatorsofTranscription）信号传导 通路的影响，探讨苦参碱是否通过增加SHP2、SOCS3、PIAS1 的表达负性调控JAK-STAT 信号传导通路活性，从而发挥抑癌效应，这为临床宫颈癌的抗癌药物研制和应用开拓了 新方向。 研究方法：1、培养人宫颈腺癌Hela细胞株、人宫颈鳞癌Siha细胞株。2、采用噻 唑蓝比色法（MTT）检测不同浓度苦参碱 （0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2. mg/ml、 4. mg/ml）对宫颈癌Hela、Siha细胞作用时间24h、48h、72h后细胞的增殖情况，以不 加药细胞作为对照组，不加细胞仅加培养基为空白对照组，最终选取一个最适时间点和 三个最适药物浓度水平用于后续试验。3、RT-qPCR检测在不同浓度苦参碱干预宫颈癌 Hela、Siha细胞48h后，细胞中SHP2、SOCS3及PIAS1 的mRNA 的表达情况。4、Western blottling 印迹法检测在不同苦参碱浓度干预48h后，宫颈癌Hela、Siha细胞中SHP2、 SOCS3及PIAS1蛋白的表达水平情况。 研究结果： 1 不同浓度苦参碱均能抑制宫颈癌Hela、Siha细胞的增殖，呈剂量依赖性和时间依 赖性。浓度相同时，随着苦参碱作用时间的增加，Hela、Siha细胞的增殖抑制率明显升 高 （P0. 5）；同一作用时间，随着苦参碱浓度的增加，Hela、Siha细胞的增殖抑制率 也明显升高（P0. 5），其中以苦参碱浓度4.0mg/ml、作用时间72h 的细胞增殖抑制率   最高，宫颈癌Hela、Siha细胞的增殖抑制率分别为 （75.07 2.32）%、（70.88 3.27）%， 各浓度和时间之间比较具有显著性差异（P0.01）。选择三个最适药物浓度(0.5mg/ml、 1. mg/ml、2. mg/ml)以及一个最适作