昆虫杆状病毒表达系统表达人载脂蛋白A-Ⅰ.pdfVIP

维普资讯 l9卷 6期 生 物 工 程 学 报 Vo1．19 No．6 2003年 l1月 ChineseJournalofBiotechnology November 2oo3 昆虫杆状病毒表达系统表达人载脂蛋 白A．I 朱媛娥 徐慧斌 赵志安 钟 江 (复旦大学生命科学学 院 微生物学和微生物工程系 ，上海 200433) 摘 要 载脂蛋 白apoA．I是高密度脂蛋 白中最主要 的蛋 白，在胆 固醇代谢及动脉粥样硬化等疾病 的发生和控制 中有重要作用 。为 了建立大量生产和制备该蛋白的方法 ，昆虫杆状病毒表达系统被用来高效表达 了两种形式的人 apoA．I。不带有信号肽序列的proapoA．I蛋 白表达后主要在细胞 内，但在感染的晚期也有相当量的重组蛋 白进入 细胞培养液 中。用蛇磷脂酶 A2抑制因子 a亚基信号肽序列引导表达 的apoA．I蛋 白在感染早期可 以被分泌到培 养液中。在此基础上 ，通过 PhenylSepharose疏水柱层析 ，从感染细胞 的培养液 中初步分离纯化 了成熟的apoA．I蛋 白。这一结果为 apoA．I的进一步研究和应用奠定 了基础 。 关键词 载脂蛋白，高密度脂蛋 白，杆状病毒 ，疏水层析 中图分类号 Q786 文献标识码 A 文章编号 1000—3061(2003)06—0692．06 高密度脂蛋白(High—densitylipoprotein，HDL)是 端还带有 6个氨基酸的pro序列。在血浆里 ，pro序 血浆 中的一类重要 的脂蛋 白，它参与胆 固醇逆 向转 列被某种未知的金属蛋 白酶切 除，最终形成含 243 运 (Reversecholesteroltransport，RCT)，将肝外细胞和 个氨基酸的成熟 apoA．I乜]。louisetal[1发现 pro 组织 中多余的胆固醇转运至肝脏 ，并加 以转化和清 序列并非胞 内加工所必须 ，去除 pm序列并不影响 除，因而具有抗动脉粥样硬化作用 “。载脂蛋 白 信号肽 的正确切割 ，但是会减缓 apoA—工分泌的速 A—I(ApolipoproteinA．I，apoA—I)是 HDL中最主要 率 。也有研究提出虽然 proapoA—I也具有构成 HDL 的载脂 蛋 白 ，它的缺失或减少会 引起血浆 HDL 等功能，但成熟 apoA．I蛋 白可 以更好地促进胆固醇 的降低 ，导致冠心病发病率的增加 。也有研究表 逆向转运过程 中前 t3-HDL向a．HDL的转化 ，有助 明，apoA．I蛋 白还具有抗氧化 、抗凝和抗炎作用 ，以 于apoA—I功能的发挥 。 及调节细胞粘附分子的表达 、介导细胞 内信号传导 进一步探索 apoA—I的结构与功能及其在新药 等功能。它的这些功能对保护人体动脉管壁具有十 开发 中的应用，需要建立基 因工程高效表达生产 分重要的意义 ]。因此 ，apoA—I已 日益成为脂类代 apoA．I方法。本研究成功地利用 昆虫杆状病毒表 谢研究的焦点之一。此外研究发现肝脏细胞膜表面 达系统 ，在昆虫 Sf9细胞 中高效表达 了proapoA—I， 有 ap。A—I和 HDL的高亲和性受体¨ ，因此游离 还将一种新的蛇磷脂酶 A2抑制因子信号肽 用于 apoA—I以及 HDL具有肝脏靶 向的特 点，这 一重要 apoA—I成熟蛋白的直接分泌表达 ，并且初步分离纯 的特点使得 apoA—I在靶 向药物研究 中具有 良好 的 化了该蛋白。 应用前景 。 1 材料和方法 在体 内，apoA—I主要 由肝脏细胞和肠细胞合 成 ，胞 内新合成的 apo