PartI分子本质要点.pptVIP

影响 Tm值的因素 ☆ 在 A, T, C, G 随机分布的情况下 ☆ GC%含量相同的情况下 GC%愈高 → Tm值愈大 AT形成变性核心，变性加快，Tm 值小 ☆ 小于100bp 的 D.S DNA分子比较 片段愈短， 变性愈快，Tm值愈小 ☆ 盐浓度的影响 当Na+浓度低 屏蔽作用小 斥力加强 Tm ↓ 2. DNA 分子的复性 (anneal or renaturation) D.S DNA S.S DNA Denaturation ▲ ▼ Renaturation 复性过程依赖于单链分子间的随机碰撞 ( Depends on the collision of complementary S.S. DNA ) 影响DNA复性过程的因素 ： 阳离子浓度 0.18 ~ 0.2M Na+ 可消除polydNt 间的静电斥力 复性反应的温度 Tm - 25℃ (60-65℃) 以消除S.S. DNA 分子内的部分二级结构 S.S. DNA分子的长度 S.S. DNA愈长 → 分子扩散愈慢 → 复性愈慢 S.S, DNA 的初始浓度 C0 DNA 分子中, dNt 的排列状 (随机排列, 重复排列) 3. 杂交 （Hybridization) Northern blotting: RNA + DNA* / RNA* Southern blotting: DNA + DNA* / RNA* 将具有一定长度互补序列的两条核酸单链在适当条件下 褪火，按碱基互补配对的原则形成杂合双链分子，如杂合的 DNA/DNA，DNA/RNA，RNA/RNA。 　　杂合分子中两条单链之一为待测核酸，另一条为探针链 （通常序列已知）。 * * * Prion 传染性病源蛋白颗粒 * C5甲基化使polyGC重复序列采取Z构象。果蝇唾液腺染色体中有B,Z两种构像的DNA。 * 超螺旋总是要向着抵消初级螺旋改变的方向发展 * * * 碱基排列对Tm值具有明显影响（除变性核心外）（碱基堆积力的差异 ） Part I 绪论 1.1 分子生物学的发展简史 1.2 遗传物质的分子本质 1.3 基因、基因组和基因组学 1.2.1 什么是遗传物质？ DNA 1944, Avery DNA is the genetic material. 1952, Hershey (2) RNA 　　RNA病毒 （virus）,类病毒（viroid） (3) 朊病毒（prion） 是否存在核酸之外的其他遗传物质？ 1.2.2 DNA的一级结构 一级结构：4种脱氧核苷酸的连接及其排列顺序。 碱基 basic unit 脱氧核糖核苷 deoxyribonucleoside + + H2O 脱氧核糖核苷酸deoxyribonucleotide (dNt) H H 脱氧核糖核酸 deoxyribonucleic acid, DNA 脱氧核糖核苷酸以3’，5’磷酸二酯键 聚合成为脱氧核糖核酸（DNA）链。 链的一端的核苷酸有自由的5’磷酸基 团，称5’端；另一端核苷酸具有自由 的3’羟基，称3’端。 DNA链的方向就是从5’端到3’端。 DNA分子通常以线性或环状的形式存在。 大多数DNA由两条互补的单链构成。少 数生物的DNA，如某些噬菌体或病毒是 以单链形式存在的。 1.2.3 DNA的二级结构 二级结构：DNA双螺旋结构 Watson – Crick右手双螺旋结构 1，主链 2，碱基对 3，螺距 4，大沟和小沟 DNA分子 X 光衍射 科学家简介8 l? 蛋白质因子与DNA 的特异结合依赖于 氨基酸与DNA 间的氢键的形成 l?? 蛋白质因子沿大沟与DNA形成专一性 结合的机率与多样性高于沿小沟的结合 l? ?大沟的空间更有利于与蛋白质的结合 DNA双螺旋的大沟和小沟 影响双螺旋结构稳定性的因素 碱基堆积的棒状实体 l?????? 氢键 弱键, 可加热解链 氢键堆积, 有序排列 (线性, 方向)? l?? 碱基堆积力 同一条链中的相邻碱基之间的非特异性作用力。 碱基堆集力的来源 疏水作用; 0.34 nm 嘌呤环与嘧啶环Van der Waal作用半径约为0.17nm； 碱基对间距0.34nm 累积的Van der Waal的作用力 l ? 磷酸基团间的静电斥力? l ? 碱基分子内能 磷酸基团的负电对DNA双