前列腺特异性抗原(PSA)的检测.pptVIP

四、PSA的检测方法 四、PSA的检测方法 四、PSA的检测方法 Luminex技术与ELISA方法 高通量检测：用微量标本进行多个指标检测 比ELISA的灵敏度高100-10000倍 重复性好 操作简便、省时省力 目录 PSA简介 PSA的制备 抗血清的制备 PSA的检测方法 四、 一、 二、 三、 一、 ＰＳＡ简介 前列腺特异性抗原（Prostate specific antigen，PSA）是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中，是精浆的主要成分之一。 19世纪60年代末，Hare发现，在前列腺液及精液中含有一种分子量大约34000的精液特异性蛋白质 前列腺液中以有活性的游离形式（f-PSA）存在，血清中的PSA主要以结合形式存在，通常以f-PSA与结合PSA的和，总PSA（t-PSA）代表血清总的PSA水平。 临床上常用血清PSA密度（PSA与前列腺体积的比值:PSAD）和PSA速率（血清PSA水平的年变化率:PSAV），帮助鉴别良性前列腺增生和前列腺癌 二、ＰＳＡ的制备 （一）组织和细胞可溶性抗原的粗提 （二）可溶性抗原的提取和纯化 （三）纯化抗原的鉴定 二、ＰＳＡ的制备 （一）组织和细胞可溶性抗原的粗提 1.组织匀浆的制备—— 高速捣碎组织法 2.细胞的破碎——冻融法 二、ＰＳＡ的制备 （二）可溶性抗原的提取和纯化---聚乙二醇沉淀法 （三）纯化抗原的鉴定 分子量的鉴定方法--- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 通常选用分子量为2000-6000的PEG，蛋白质分子量越大， 沉淀所需PEG浓度越低 三.抗血清的制备 （一）选择免疫动物---雄性成年小鼠 （二）免疫方法----皮下注射 （三）动物采血法----断尾采血法 （四）抗血清的纯化---亲和层析法 四、PSA的检测方法 （一）化学发光法 （二）放射免疫法 （三）电化学发光免疫分析法 （四）Array-ELISA 法 （五）Luminex液相芯片 四、PSA的检测方法 1.实验原理 Array-ELISA技术平台主要包含3项技术:酶促化学发光技术、 现代微阵列技术以及低温电荷耦合器（CCD 成像技术。 原理是在保证相互无干扰的前提下,多种特异性的生物活性物 质以特定的微阵列形式排列于每个微孔板板孔内,待血清或血浆中 抗体/抗原与包被抗原/抗体特异性结合后,再与酶标抗体结合形成 免疫复合物,加入发光液,经生物芯片阅读仪分析处理,可同时获得 多项指标定量检测结果 四、PSA的检测方法 ２．仪器与试剂 Roche Cobas601电化学发光分析仪 Array- ELISA原理试剂盒 四、PSA的检测方法 3.方法：