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内容提要 基本原理 仪器基本结构 仪器校准 仪器定性测定 仪器定量测定 仪器维护 紫外-可见分光光度计使用领域 化学化工行业 　　有机物的紫外光谱定性、定量检测、无机中配合物的测定、物化中催化动力学测定等。 环境领域 　　主要用于水质检测，如：化学需氧量检测。　 农、林、牧、渔业 　　农药残留检测、作物成分检测、化肥检测、土壤成分检测、植物保护、植物检疫等。 医药行业 　　药物含量测定等。 …… 紫外-可见分光光度计的特点 远紫外光区: 100-200 nm 近紫外光区: 200-380 nm 可见光区: 380-760 nm §紫外-可见分光光度法基本原理 紫外光谱图示例 吸光度（A） 为了方便刻划物质吸收光的程度，引出吸光度这一参数。 　　　吸光度定义为：以10为底的透射率的负对数。 朗伯-比尔定律 　吸光度与被测物质的性质、浓度，以及通过的光程密切相关。 　　　当一束平行的单色光通过某一均匀溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的长度的乘积成正比。这被称为“朗伯－比尔定律”。 朗伯－比尔定律成立的条件 单色光 　　　此条件主要决定于仪器。好的仪器能得到优良的单色光。 　　　决定能否得到优良的单色光的仪器器件主要是光栅和滤光片。此外仪器单色器部分的密封性也决定了单色光的纯度。 稀溶液 　　　此条件决定于操作人员本身。浓度过大可形成分子缔合，此时浓度与吸光度不成正比！ 　　　切记：做紫外一定要配成稀溶液！ “稀溶液”的标准？ 吸光度在0.2~0.8（透光率15.8~63%）可视为理想的符合朗伯－比尔定律的“稀溶液”。 在什么情况下误差最小？ 紫外-可见分光光度计　 紫外-可见分光光度计的基本结构　 单光束的基本结构 单光束光路（Czerny-Turner式光路） 岛津UV2550光路 单光束紫外分光光度计的辨别 单光束紫外仪一般有一个拉杆。检测参比池和样品池时，通过拉杆推到合适位置。 样品室只有一个光的通道。 双光束紫外分光光度计的辨别 双光束紫外仪没有拉杆。　 样品室有两个光的通道。 双光束光路（无锡科达8500-II型） 思考１： 1 下列光路是双光束还是单光束？ 2 单色器部分是C-T式还是Littrow式？ 双光束紫外分光光度计如何实现光的分束？ 半反半透镜：一种方法是通过半反半透镜来分束：在一个透镜上镀反光物质（一般是铝），使一半面积反光，一半面积透光。 斩光器：另一种方法是通过斩光器来分束：即一个扇形反光镜通过马达带动，以均匀速度转动。光线遇到扇形镜时，光线被反射；光线没遇到扇形束时，光射直射通过。 半反半透镜 斩光器 搞清光路的意义 在紫外分光光度计中，光路决定了仪器的档次。 紫外分光光度仪价格相差很大，最低价者约5000元左右（只有可见光的仪器约2000元左右），最高价者可达60万元左右。光路及相应的构件是决定价格的至关重要因素！ 不同的光路适应于不同的检测要求。 不搞清光路，购买和使用仪器就会比较盲目，就可能会被供应商呼悠！ 紫外分光光度计结构实例介绍 以U-2800型紫外分光光度计为例，介绍其整体实体结构。 U-2800为双光束型分光光度计。 U-2800内部结构图（实体图） 氘灯 氘灯是利用气体放电原理而获得连续光谱的光源。 氘灯工作原理：灯丝阴极发射的热电子在电场加速下向阳极运动与氘气分子实现非弹性碰撞而激发，从而辐射氘分子的连续光谱。利用其阳极光柱，因此强度很大。为避免阳极电弧光斑，在阳极垂直方向安装一个开有小孔的隔挡片以隔除杂光，使光自小孔发出。 波长范围一般为190~400nm的连续光谱带。氘灯的使用波长范围一般为190~360nm。在486.0、583.0及656.1nm三处各有一根特征谱线，经常被用来作为标定仪器的理论波长值 。 氘灯光谱 U2800的灯室构造 某品牌的紫外可见分光光度计灯室构造 2.单色器 思考：为什么要有狭缝？ 此处为光栅，由马达带动转动，从而可调节不同的波长。光栅为核心精密部件，不能用手摸光栅面，一摸就坏！ 　　目前紫外分光光度计上使用的光栅一般为凹面闪耀光栅，看上去像一块普通的反光镜，但其加工难度大，价值高。是分光计是最核心的光学部件！ 光栅 光栅是用来分光的。也就是把一束复合光中某一波长的光集中起来，使之成为“纯的”单波长光。 目前所用的光栅通常为闪耀光栅。其光能损失小。 紫外分光光度计上的光栅一般是1200、1800条刻痕/mm。每mm长度上刻痕越多，分辨率越高，仪器越高档。当然，分辨率也与狭缝宽度相关。 此外，在原子吸收分光光度计、电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP）上也用到光栅，其光栅要求更高，通常是3600条、4200条刻痕/mm。 光栅原理（联系物理中