山核桃蒲黄酮类合物的提取、纯化、抗氧化性及鉴别.pdfVIP

摘要 本研究以山核桃蒲为原料，采用超声波辅助提取其中总黄酮，然后以大孔吸 附树脂对其进行纯化，并对得到的总黄酮提取物进行抗氧化性研究，运用HPLC／ Q．TOF．MS方法对纯化后的总黄酮提取物进行分析。研究结果如下： (1)采用超声波辅助提取山核桃蒲总黄酮，以总黄酮得率、纯度为考察指标， 在超声波功率250W的条件下，对料液比、超声提取时间、提取温度和乙醇水溶 液的浓度4个因素进行单因素试验。在单因素试验的基础上，选择对总黄酮得率、 纯度的影响显著的3个试验因素，进行二次通用旋转试验，得到超声波辅助提取 总黄酮的最佳工艺条件：料液比1：12、温度72℃、提取时间52min。此条件下总 黄酮得率2．19％，纯度可达到16．62％。 (2)以最佳工艺条件大量提取山核桃蒲总黄酮，以回收率、纯度为考察指标， 通过4种不同型号的树脂对山核桃蒲总黄酮静态、动态吸附解吸试验，确定D101 为山核桃蒲总黄酮分离纯化的适宜大孔树脂。D101型树脂最佳工艺条件为：上 样液浓度应小于9．9m∥mL，上柱总黄酮量与干树脂之比为1：8，用5Bv的70％ 乙醇水溶液洗脱。山核桃蒲总黄酮回收率在70％以上，纯度可达67％以上。 (3)纯化后的山核桃蒲总黄酮提取物和VC对DPPH自由基、羟基自由基、 超氧阴离子的清除效果以及还原力都与其浓度呈正相关。山核桃蒲总黄酮提取物 对DPPH自由基、羟基自由基的清除效果以及还原力均低于VC，两者之间的差 距随着浓度的增加而增大。在低浓度时，总黄酮提取物对超氧阴离子的清除能力 略强于VC，之后随着浓度的增加，VC清除能力大于总黄酮提取物。总黄酮提 取物对DPPH自由基的IC50为0．039mg／mL，维生素C的IC50为Q．035m∥mL。 总黄酮提取物对羟基自由基的IC50为0．309m g／mL，维生素C的IC50为0．172mg／m mL。 (4)对纯化后的山核桃蒲总黄酮提取物，根据HPLC／Q．TOF．MS方法对分离 出的主要峰进行分析，采用正离子模式，由一级质谱得到化合物的准确分子量， 借助masslynx软件计算出其元素组成。依据二级质谱中的碎片信息，并参考相 关文献中的数据，确定7个主要化合物分别为5．羟基．6，7．二甲氧基黄烷酮、大 黄素甲醚、大黄酚、5．羟基．4‘，7．二甲氧基黄烷酮、乔松酮、乔松素、7．羟基一2‘， 4‘．二甲氧基黄烷酮。其中，大黄素甲醚和大黄酚属于蒽醌类，其余5种皆为黄 酮。 关键词：山核桃蒲，黄酮，纯化，抗氧化性 ABSTRACT of’ultrasonlc nutasraw use mis materials，the In hickory study，perica印of then reslnand oftotal purifiedbymacroporous assistedextractionnavonoids，and naVonoids oftotalflavonoids purified antioxidant extracts，analysis studies activity areasfollows： method．Theresults extractsbvHPLC／Q—TOF．MS extractionofflavonoids矗omhickory