第二节免疫学检测精要.pptVIP

（二）免疫细胞功能测定 1.T细胞功能测定 淋巴细胞转化试验：用PHA(植物血凝素)刺激体外培养的T细胞，使T细胞发生活化反应，向增殖细胞转化。 E花环形成试验：测定T细胞总数 细胞毒试验：常用同位素51Cr(铬)释放法 2.B细胞功能测定：各类Ig的含量测定、溶血空斑试验、酶联免疫斑点法。 * 免疫学检测 ●抗原或抗体的检测 ●免疫细胞及其功能检测 一、抗原或抗体的检测 (一) 检测的原理 1. 已知抗体测抗原（多用于定性） 2.已知抗原测抗体（多用于定量） (三) 影响抗原抗体反应的因素 1.温度： 最适温度为37℃ 2.电解质：常用生理盐水 3.pH：最适pH6~8 3.抗原抗体反应的可见性 2.抗原抗体反应的可逆性 1.抗原抗体反应的特异性 (二)抗原抗体反应的特点 （四）常见抗原抗体反应的种类 1.凝集反应 类型： ★直接凝集反应 ★间接凝集反应 ★间接凝集抑制试验 ★协同凝集试验 概念：细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块称凝集反应。 凝集反应原理图解（一） 凝集反应原理图解（二） 2.沉淀反应 概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物称沉淀反应。 类型： ★单向免疫扩散 ★免疫比浊法 ★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳 单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 对流免疫电泳 3.免疫标记技术 概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。常用方法有免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。 特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。 ★放射免疫测定法 ★酶免疫测定法（ELISA） ★免疫荧光技术 常用免疫标记技术： 免疫荧光技术 酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法) （一）免疫细胞分离及数量检测 外周血 单个核细胞 鼠抗人CD3单抗 CD4＋T细胞数 鼠抗人CD4单抗 CD8＋T细胞数 总T细胞数 鼠抗人CD8单抗 兔抗鼠荧光抗体 兔抗鼠荧光抗体 兔抗鼠荧光抗体 60～80% 55～60% 20～30% 正常值： CD4＋T / CD8＋T 比值 = 2:1 T细胞总数及亚群检测 二、免疫细胞及其功能的测定 抗凝血 分层液 抗凝血 血浆 白膜层 红细胞 离心 淋巴细胞的分离 T细胞亚群的检测——花环法（一） T细胞亚群的检测——花环法（二）