氧自由基-线粒信号通路与脑创伤神经细胞死亡以及Edaravone的治疗作用机制研究.pdfVIP

中文摘要 氧自由基．线粒体信号通路与脑创伤神经细胞死亡 以及Edaravone的治疗{乍甩机制研究 摘 要 我室的前期工作己证实TBI后氧化应激可诱导神经细胞 凋亡。然而该过程的信号转导通路并不清楚。为了寻求通路 上的关键点，并以此找到治疗新措施，本课题继续探索这一 信号转导通路。 目的：探讨脑创伤后在抗氧化剂Edaravone干预下大鼠 大脑皮质凋亡相关蛋白表达及大鼠行为学改变情况，证明脑 创伤后氧化应激诱导神经细胞凋亡信号转导的通路和 Edaravone对脑保护作用的可能机制，以期为临床治疗提供理 论依据和开拓新的治疗前景。 80只，体重300．350 方法：雄性成年SD大鼠I g，随机分 组，分为颅脑创伤组、Edaravone治疗组、实验对照组。每组 (TBI)组给予等量生理盐水。注射方法为伤后10分钟尾静脉注 中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型，大鼠在各自时问点处死； HE染色观察大鼠颅脑损伤后皮层神经元的病理改变；免疫组 化法和Ⅱ脏L法以及硫代巴比妥酸缩合法观察不同时相点 化情况以及Edaravone的干预下大鼠行为学改变；阳性细胞免 Med 疫反应强弱采用Motic6．0计算机真彩色图象分析系统以 中文摘要 for 平均光密度进行半定量分析；实验数据用SPSSll．5 windows软件进行统计学处理。 结果：大鼠致伤后多数短暂呈去大脑状态及呼吸抑制。 多数大鼠蛛网膜下腔可见出血或黄染，顶叶打击区有散在的 脑挫裂伤，脑实质内部散在血肿。HE染色可见创伤后6小 时大脑皮质出现散在变性坏死神经元，伤后24h达高峰。上 述结果与Mamarou所描述的模型伤后表现大致相符。 自由基中间产物丙二醛(MDA)测定结果：伤后6小时 即可检测到MDA的升高，与对照组相比，24小时显著升高 时相点均有所降低，其中以24h、48h和72h有显著性差异 (pO．01)。 与对照组相比，创伤组Cytc阳性细胞免疫反应6h增强， 24h、48h和72h明显降低(p0．01)。 Bcl一2表达在伤后应激性增高，于3h达高峰，以后逐渐 于48h达高峰。Edaravone能显著改善二者的比例变化，与 创伤组比较在24h、48h、72h差异具有显著性(pO．01)。 脑创伤后，TUNEL阳性细胞数逐渐增多，24小时以前 以TUNELI型细胞为主，24小时后TUNEL阳性细胞以II 鼠大脑皮质神经细胞凋亡数，与创伤组比较在24h、48h、72 h有显著性差异(p0．01)。 中文摘要 性细胞数密切相关(F0．925，p0．01)。 o 功能的缺陷程度(po，01 结论：1．大鼠TBI后皮质神经细胞死亡存在坏死和凋亡 两种方式，其中以凋亡为主。2．氧自由基．线粒体，Cytc是脑 创伤后神经细胞凋亡的信号转导通路中的一条。脑创伤导致 大量自由基产生，进而导致线粒体渗透性转换孔 (mitochondrialtransition permeabilitypore，PTP)开放，使Cytc 释出，经过下游的Bcl．2、Bax等蛋白表达的调整，导致大脑 皮层神经元发生凋亡。3．氧自由基、Bcl．2、Bax三因素在细 胞色素c释放的调节中，氧自由基可能是细胞色素c释放的 主要因素，Bax和Bcl．2二者的比例对Ctyc释放的调节起重 要作用，Bax和Bcl．2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因 的调节中可能仍发挥重要的作用。4．Edaravone对颅脑创伤有 治疗作用，其机制之一是通过减少自由基生成，抑制PTP开 放，减少Cytc释放，上调Bcl．2、下调Bax，起到抗凋亡作 用，减少神经元坏死和凋亡，同时本实验未发现Edaravone 对脑创伤治疗的副作用。因此，建议将Edaravone用于临