诱导型一氧化氮酶在小儿恶性淋巴瘤中的表达及一氧化氮对淋巴瘤细胞生长的影响.pdfVIP

中 文 摘 要 诱导型一氧化氮合酶在小儿恶性淋巴瘤中的表达 及一氧化氮对淋巴瘤细胞生长的影响 摘 要 H的:恶性淋巴瘤(MaligantLymphoma)是儿童时期最 常见的恶性肿瘤之一，发病率有逐年增高之势。随着研究的 深入及治疗方法的不断完善，其缓解率及无病生存率有了很 大提高，但仍存在强化疗药物带来的毒副作用、多药耐药等 多种问题。目前对其病因、发病机制尚未完全阐明，需要进 一步探讨，为之寻求更有效的治疗措施。自从人们发现 “内 皮舒血管因子”就是一氧化氮 (NO)后，有关NO的研究蓬 勃兴起，成为当代医学研究的热点之一。近几年研究表明 NO与肿瘤关系密切，参与肿瘤发生、发展、转归等多个过 程，成为肿瘤预防和转移的崭新研究领域。NO是由一氧化 氮合酶 (NOS)催化底物L一精氨酸 (L-arginine,L-arg)而 生成，尤其是诱导型 NOS(iNOS)与肿瘤关系更为密切。 多种肿瘤组织如结肠癌、乳腺癌、肺癌等都发现了iNOS的 表达，但NO在小儿恶性淋巴瘤中的作用及对淋巴瘤细胞的 影响国内外鲜有报道。本文通过免疫组化技术观察 iNOS和 血管内皮生长因子 (VEGF)在小儿恶性淋巴瘤活检标本中 的表达情况及其与微血管密度 (MVD)的关系;又以 iNOSmRNA阳性的人Burkitts淋巴瘤细胞系BJAB细胞为研 究对象，观察NO浓度的改变对淋巴瘤细胞生长的影响，从 而分析NO及iNOS在小儿恶性淋巴瘤发生、发展中所起的 作用。为NO制剂参与联合化疗提供实验依据，为小儿恶性 中文 摘 要 淋巴瘤的治疗开辟新途径。 方法:1恶性淋巴瘤活检标本免疫组化染色:收集 1990.12-2004.12在河北医科大学第四医院和河北省儿童医 院就诊的18周岁以下淋巴瘤患者的淋巴结活检标本31例。 诊断标准依据第七版 《实用儿科学》，其中HD3例，NHL28 例。HD依据AnArbor(1971)分期标准，其中III期 1例， IV期2例;NHL依据St.Jude标准进行临床分期，其中III期 I1例，IV期17例。NHL患者中T细胞型17例，B细胞型 11例;男24例，女7例。选取2004.9-2005.1在河北医科大 学第二医院小儿外科就诊住院的非感染非肿瘤患者术中切 除的淋巴结8例，作为正常对照组。所有39例标本均经 10 %，卜性甲醛固定，酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋后4 um厚连续切片进行HE和免疫组化S-P法染色。NOS及 VEGF阳性判断标准及MVD计数均参照相关文献’【]进行判 定。用 SPSS11.5统计分析软件进行统计学分析，病例组与 对照组间iNOS和VEGF的表达显著性检验用确切概率法。 iNOS和VEGF之间用Spearman相关分析，iNOS阳性组和 iNOS阴性组MVD的比较用t检验，NHL组中iNOS的表达 与临床特征的关系用确切概率法，显著性检验水准为0.05. 2BJAB细胞体外培养:对照组:细胞培养基中加入与 实验组等体积的Hanks液;实验组:细胞培养基中分别加入 Hanks液溶解的底物L-arg和NOS抑制剂N0一单甲基一L一精氨 酸 (L-NMMA)，终浓度均分别为0.0imm,0.1mm,imm, 5mM。应用MTT还原法检测细胞增殖率，用硝酸还原法检 测细胞上清液中NO代谢终产物亚硝酸盐 (NO-2)含量，可 间接反映NO的含量，用化学比色法测细胞上清液中iNOS 中文 摘 要 浓度，用 SPSS11.5统计分析软件进行统计学分析，各组均 数的比较行单因素方差分析 (ANOVA)，用最小显著差法 (leastsignificantdifferent,LSD)做两两t匕较，P0.05为有 显著性差异。 结果:1iNOS和VEGF免疫组化表达结果:31例淋巴 瘤组织中有23例iNOS呈阳性表达，对照组中iNOS均为阴 性，差异有显著性 (P0.05);病例组中VEGF阳性者25例， 正常对照组 VEGF均为阴性，两者比较有显著性差异 (P0.05)0 2iNOS表达与VEGF和MVD的关系:病例组中iNOS 表达与VEGF呈明显正相关 (r