肿瘤坏死因子及基因多态性与多发性硬化的相关性研究.pdfVIP

中文摘要 肿瘤坏死因子及其基因多态性与多发性硬化 的相关性研究 摘 要 多发性硬化(multiple 经系统炎性脱髓鞘为主要特征的自身免疫性疾病，有遗传易 感性。现普遍认为MS是一种遗传易感个体在某些环境因素 影响下通过变态反应性免疫障碍而引发的多病因疾病。近年 研究提示，MS两种亚型——西方型和亚洲型不仅临床特征 不同，其免疫遗传背景也存在着显著差异。 necrosis 肿瘤坏死因子(tumor 和TNFl3，是一种参与免疫应答的细胞因子，分别主要来源 于激活的单核巨噬细胞和淋巴细胞，两者具有相似的生物学 活性，具有广泛的诱导炎症和调节免疫的功能，而编码TNF 的基因具有多态性。TNF基因位于人类6号染色体短臂上， 单倍体基因紧密连锁。有研究表明TNF水平在MS急性期增 高并随病情好转下降；动物实验和病理研究均证实TNF与髓 鞘脱失、轴索变性有关。由于TNF的重要免疫学作用及其基 因的特殊位置，有必要从分子水平探讨其在MS发病中的作 用，我们对TNF0【和rn师6的基因多态性状况及其与MS 两种亚型不同病期发病的关系作了以下探讨。 目的：1．研究MS两种亚型——西方型和亚洲型的易 感性与n盯a和n师B基因多态性的关联，从免疫遗传学 角度探讨自身内在因素在MS发病中的作用。2．研究两型 中文摘要 n虾B基因多态性与EDSS评分、病程及发病次数等临床资 料之间的关系，进一步探讨基因多态性在MS发病中的作用。 4．分析EDSS评分与TNF水平、病程、发病次数及首次发 病年龄之间的相关性。 5．分析两型MS患者之间在EDSS 评分、首次发病年龄、性别、病程及发病次数方面有无差别。 方法：1．病例组：选择58例MS患者，均符合1983 分为西方型和亚洲型两个亚型，其中西方型MS组22例， 亚洲型MS组36例；再根据病程和病情分为急性期MS组 37例和缓解期MS组21例。对照组：选择79例无血缘关系 的健康人，年龄、性别均与病例组匹配，近期无感染、未应 用免疫抑制剂。 2．抽取研究对象清晨空腹肘静脉血，并用 EDTA抗凝，在三天之内以改良快速盐析法自血中抽提基因 目的基因片段扩增，扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳，结果参 照Marker标准判断。4．采用限制性片段长度多态性 有O．5％溴化乙锭的琼脂糖凝胶中电泳，并应用凝胶图像分 析仪观察带型，进行等位基因分型。 5．从血液标本中分离 血清，一70。C冻存，避免反复冻溶。应用双抗体夹心酶联免 6．对 疫(ELISA)方法测定血清中TNFo．和TNFl3水平。 MS组患者分别进行神经功能缺损程度的EDSS(anexpanded status disability 7．应用SAS 病次数等临床资料收集。 6．12统计软件对数 中文摘要 据进行统计分析。对照组和病例组基因型的分布经 位基因数、性别用直接计数法计数，并计算各等位基因频率， 次数以均数±标准差(x±s)表示，两组间比较用t检验， 多组间比较用单因素方差分析，必要时行多个样本均数两两 比较的SNK—q检验。采用相关和逐步多元回归检验EDSS评 分与TNFl3水平、年龄、病程及发病次数间的相关性。显著 检验水准均为P0．05。 结果：1．MS组、西方型MS组、亚洲型MS组n师Ⅸ 基因型分布及等位基因频率分别与正常对照组比较均无明 显差异(尸O．05)。 2．MS组aNFp基因型分布与对照组相 (P0．05， (45．69％)显著高于健康对照组(27．85％)，