刘冬版 第5章 种子的扩大培养资料.pptVIP

A 菌种稳定性的检查 生产菌种，必须保持稳定的生产能力，虽然菌种保藏在休眠状态的环境中，但微生物或多或少会出现变异的危险，因此定期考察及挑选稳定菌种十分重要。 方法：取少许菌种，逐级稀释，划线培养。挑出形态整齐、孢子丰满的菌落，摇瓶试验，测定生产能力。 种子质量的控制 B 无(杂)菌检查 种子制备过程中，每移种一步，均需进行杂菌检查。 方法：镜检、肉汤或平板培养、种子液生化分析。 生化分析项目：营养消耗的速度、pH变化、溶氧利用情况、色泽、气味有否异常等。 * * 种子制备的过程大致可分为： 实验室种子制备阶段 生产车间种子制备阶段 一、 实验室种子制备 保藏在沙土管、冷冻干燥管或斜面上的菌种经无菌操作接入适合于孢子发芽或者营养体生长的斜面培养基上，经培养成熟后挑选正常的孢子或营养菌体再一次接入试管斜面反复培养几代。 这一阶段也称为活化，目的是使保藏的菌种达到正常稳定的生长代谢速度。 斜面活化的菌种进一步扩大培养，根据菌种特性的不同可采用不同的培养方法。 可采用固体培养基培养孢子，直接作为种子罐的种子。 举例:产黄青霉菌，采用大米或小米为固体培养基，装入摇瓶、灭菌，要注意控制米粒含水量，使米粒不粘不散。接入孢子，25-28℃培养14d。培养结束，将孢子瓶于真空下抽去水分，使含水量10％以下，冰箱保存备用。 产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种 生产上一般采用斜面营养细胞保藏法。 通过实验室种子扩培获得一定数量和质量的菌体。 斜面菌种于32℃，培养18-24h，即可移入250mL摇瓶液体培养基，32℃培养12h，即可作种子罐种子。 例如：谷氨酸棒状杆菌。 不产孢子的菌种 一般保存在麦芽汁琼脂培养基或MYPG培养基的斜面上，4℃冰箱保存.每年移种3-4次。 斜面菌种→接入含10mL麦芽汁试管→25-27℃培养2-3d→扩大至三角瓶→25℃培养2d→移至含5-10L麦芽汁的罐→15-20℃培养3-5d→含100L麦芽汁的发酵罐。 生产啤酒的酵母菌 MYPG培养基：3g麦芽浸出物，3g酵母浸出物，5g蛋白胨, 10g葡萄糖,20g琼脂,1L水。 除蛋白质、盐类、维生素外能溶于水的浸出物质，包括含氮浸出物和无氮浸出物。 二、生产车间种子制备 采用易被菌利用的成分，如葡萄糖、玉米桨、磷酸盐等，同时还需供给足够的无菌空气并不断搅拌，使菌丝体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。 种子罐培养原则： 以实验室制备的孢子或摇瓶营养细胞做种子，经种子罐扩大培养后，满足发酵罐对种子的要求。 摇瓶菌丝体种子： 种子罐之间或发酵罐间的移种： 接种方法： 可在火焰保护下接入种子罐或采用压差法接入。 主要采用压差法，由种子接种管道进行移种，移种过程中要防止接受罐表压降至零. 种子罐级数的确定 种子罐级数指制备种子需扩大培养的次数. 种子罐的作用？ 种子制备的工艺过程中，因菌种不同，一般可以分为一级种子、二级种子和三级种子。 种子罐的级数主要取决于菌种的性质、菌体生长速度、产物品种、生产规模及发酵设备的合理利用率。 一级种子接入发酵罐发酵称为二级发酵 二级种子接入发酵罐发酵称为三级发酵 。。。。。。。 依次类推 可知发酵的级数=种子级数+1 种子罐级数的意义： 种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少移种带来染菌机会。 但也必须考虑尽量延长发酵罐生产产物的时间，缩短由于种子发芽、生长而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率。因此，种子罐级数不宜过少。 一、谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 1、斜面培养 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0～7.2。 培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 培养条件：32℃，生长18～24h。 生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次。 2. 一级种子（摇瓶） 培养条件：于1000mL三角瓶中，装液200～ 250mL，32℃培养12h。 培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5％ K2HPO4 0.1%。 培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基。 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的 1%），32℃培养7～10h。 培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解 糖代替，浓度