草鱼鱼鳞胶原蛋白提取分离工艺研究.pdfVIP

I 中文摘要 胶原蛋白（collagen）是一种白色、不透明、无支链的纤维蛋白质。分子量为 30 万道尔顿。胶原蛋白是人体留住钙质的主要成分之一，对人体的生长、发育具有 极其重要的作用。鱼鳞含有丰富的胶原蛋白，可作为胶原蛋白提取的原料。以草鱼鱼 鳞为材料，对胶原白蛋提取工艺进行考察、摸索，并对提取结果进行分析。 鱼鳞的主要成分有水分、灰分、粗蛋白、少量的鸟嘌呤和卵磷脂。对鱼鳞进行主 要成分测定，可得到其中水分、灰分、粗蛋白的含量分别为14.08%、25.58%、58.32%； 粗蛋白中的胶原蛋白占鱼鳞的含量为51.24%。 脱钙工艺：以单因素设计分析得出最优脱钙方式。具体脱钙参数为：EDTA 浓度 0.5mol/L、脱钙时间24h、料液比 1:50、脱钙温度25℃，脱钙两次。超声波辅助脱 钙的结果表明，超声波辅助脱钙的效果并不明显。 除杂蛋白工艺：分析除杂单因素试验的结果，得出具体的除杂参数为：料液比 1:40、碳酸钠溶液浓度0.3mol/L、脱杂时间6h、脱杂温度20℃，除杂三次。超声 波辅助除杂对于除杂效果有一定帮助，在超声波频率为60Hz 时除杂效果较好。 酸溶性胶原蛋白（Acid-soluble collagens）提取工艺：以经过前处理过程的草 鱼鱼鳞为原料，以醋酸浓度、提取时间和提取温度作为影响因子，进行单因素提取研 究；为了更准确的分析各个因素的相互交互影响，采用响应面法分析了醋酸浓度（A）、 提取时间（B）和提取温度（C）对ASC 提取率的影响，方差分析表明，对提取影响最 显著的是温度（C），其次是提取时间（B）和醋酸浓度（A）。提取的最佳工艺条件为： 乙酸浓度0.98mol/L、提取时间24.68h、提取温度28℃。在此条件下，ASC 提取率预 测值为15.47%。由于考虑实际操作的可行性和方便性，取乙酸浓度1mol/L、提取时 间25h、提取温度28℃作为实际操作工艺条件。此后进行的验证试验结果表明，该最 佳工艺条件下提取的可重复性较好，结果稳定可靠。 酶溶性胶原蛋白 （Pepsin-soluble collagens）提取工艺：以经过前处理过程的 草鱼鱼鳞为原料，以料液比、提取温度、提取时间和加酶量作为影响因子，进行单因 素提取研究；为了更准确的分析各个因素的相互交互影响，采用响应面法分析了料液 比（A）、提取温度（B）、提取时间（C）和加酶量（D ）对PSC 提取率的影响，方差分 析表明，对提取率影响显著的是料液比（A），其次是提取温度（B）、加酶量（D）和 提取时间（C）。提取的最佳工艺条件为：料液比 1:77、温度25℃、时间24h、加酶 量2.53%。在此条件下，PSC 提取率预测值为24.04%。由于考虑实际操作的可行性和 方便性，取料液比1：77、提取时间24h、提取温度25℃，加酶量2.5%作为实际操作。 此后进行的验证试验结果表明，该最佳工艺条件下提取的可重复性较好，结果稳定可 I 靠。 对ASC 和PSC 的粗提物进行纯化，纯化后的ASC 和PSC 纯度分别为94.1%和90.8%。 胶原蛋白氨基酸分析结果为：ASC 和 PSC 水解液中的游离氨基酸总量分别为 98.80% 和92.06%，两者羟脯氨酸含量分别为9.70%和11.6%。对比本研究的提取胶原蛋白氨 基酸分析结果与前人Ⅰ型胶原蛋白氨基酸分析结果，可以看出，草鱼鱼鳞胶原蛋白为 典型的Ⅰ型胶原蛋白，ASC 和PSC 提取工艺参数研究结果可靠。 关键词：鱼鳞，羟脯氨酸，提取，工艺参数，胶原蛋白 II Abstract Fish scales accounted for 2.5% of the total mass of the fish. Fish scales are rich in protein and various minerals. It mainly composed of protein and hydroxyapatite. Protein accounted for 50% to 70% of the total mass of fish scales .Protein mainly