分子发光资料.ppt

* 类型 碰撞猝灭： 激发单重态的荧光分子与猝灭剂分子相碰撞，荧光分子以无辐射跃迁的方式回到基态。 静态猝灭： 荧光物质分子与猝灭剂分子生成非荧光的络合物。 转入三重态猝灭： 发生电子转移反应猝灭： 猝灭剂与荧光物质。 荧光物质的自猝灭： 浓度较高单重激发态的分子在发生荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起的自猝灭。 溶解氧与荧光物质。 二、荧光分析仪 Cary Eclipse 荧光分光光度计 荧光、磷光化学/生物发光 美国瓦里安技术中国有限公司 测量荧光的仪器由激发光源、样品池、单色器以及检测器四部分组成。 第一单色器 或滤光片 记录仪 第二单色器 或滤光片 荧光 光源 激发 样品池 二、荧光分析仪 由光源发出的光经激发单色器分光后得到所需波长的激发光，然后通过样品池使荧光物质激发产生荧光。 荧光是向四面八方发射的。为了消除入射光和散射光的影响，荧光的测量通常在与激发光成直角的方向上进行。 为了消除溶液中可能共存的其他光线的干扰(如由激发光所产生的反射光和散射光以及溶液中的杂质荧光等)，以获得所需要的荧光，在样品池和检测器之间设置了发射单色器。 （4）检测器 由光电管和光电倍曾管作检测器，并与激发光成直角。 （1）光源 卤钨灯、高压汞灯（线）、高压氙弧灯（带）。 （2）样品池 荧光用的样品池须用低荧光的材料制成，通常用石英，形状以四面透光、方形和长方形为宜。 （3）单色器 荧光计：滤光片；荧光分光光度计：光栅 1、荧光分析方法的特点 （1）灵敏度高 （2）选择性强 （3）试样量少和方法简单 （4）提供比较多的物理参数 三、分子荧光分析法的应用 2方法 直接荧光法 被测物本身有荧光 被测物与试剂反应后 F与物质的 浓度成正比 荧光猝灭法 被测物使荧光熄灭。由荧光强度的降低程度来测定被测物的含量 间接荧光法 某些阴离子夺取金属络合物中金属离子，而释放出能发荧光的配位体 催化荧光法 反应速度慢，荧光微弱，难测定，金属离子将加速反应进行 3、荧光定量分析基础 If: 荧光强度 Ia: 所吸收的辐射强度 ? ：荧光效率 荧光强度与浓度: 将指数展开： 如果吸光度A0.05, 方括号中其他各项与第一项相比均可忽略: 由于A=?bc，故在实验条件固定时，荧光强度与浓度成正比，即： 4、荧光定量分析的方法 标准曲线法 2、应用 （1）无机化合物的分析 加入某种试剂将非荧光物质转化为荧光物质进行分析。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定. 分析样品 环境水样、土样、生物或粮食样品 分析项目 痕量铬 分析方法 利用Cr3+对碱性鲁米诺-H2O2发光体系线性催化作用定量测定铬 分析条件 1）将试样经混酸用微波压力消解处理为试液（水样则不必处理），用H2SO4将铬VI还原为Cr3+ 2）用EDTA和PAN联合配位剂掩盖Ca2+，Mg2+，Cu2+，Zn 2+，Fe3+，Fe2+和Co2+等离子 3）当固定H2O2和鲁米诺（pH12.0)的浓度和用量，最大化学发光波长λmax=425nm时，化学发光强度与Cr3+浓度（10-10---10-2g.ml-1）呈线性关系，检出限为6.2*10-13g.mL-1 4) 标准溶液和待测液的pH都要调到2.5左右 分析结果 根据相对发光强度（平均峰值）与Cr3+浓度成正比，求出试样中痕量铬的含量。 化学发光分析法测定痕量铬 (2)生物与有机化合物的分析 DNA 片段 溴化乙锭， 嵌入DNA双链螺旋结构后，使DNA发荧光。这类试剂称作DNA的荧光探针 （陈秀英等，化学通报，2004，67卷，W68） 抗体、抗原 酶联免疫吸附分析示意 Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） 分析样品 牛乳和动物组织等生物试样 分析项目 蛋白质 分析方法 利用蛋白质中存在的色氨酸和酪氨酸所发生的荧光强度定量测定蛋白质含量 利用荧光探针（某种与非荧光或弱荧光物质形成较强荧光的有机配位溶剂）与蛋白质结合使其荧光强度增强的方法来测定蛋白质 利用蛋白质能使某些荧光染料（曙红Y）的荧光发生淬灭而对蛋白质定量 分析条件 λex=280nm λem=340-350nm 利用1-苯氨基-8-萘磺酸（ANS）或2，6-对甲苯氨基萘磺酸（2，6-TNS）作荧光探针 用曙红Y的溶液（pH3.0)在紫外光照射下λem=540nm 分析结果 利用荧光强度与蛋白质浓度成正比求出试样中蛋白质含量 根据荧光强度的增大值与蛋白质浓度呈线性关系，可测定试样中蛋白质含量 根据荧光