氧化低密度脂蛋对不同年龄大鼠主动脉平滑肌细胞的核因子κb信号传导通路的影响和hdl的保护作用.pdf

氧化低密度脂蛋白对不同年龄大鼠主动脉平滑肌细胞的核因子 KB信号传导通路的影响和HDL的保护作用 摘要 NF．K 霹肇龄大甄悫管乎潺瓿缨戆PDGF—B链表达水平夔影响。 方法；分离提焚LDL，HDL，逶过氧纯、签定，制各与本组j遣去实验同一 标准魄OX～LDL。分别培养2月龄和主。月龄大鼠主动脉平滑舰原 代细胞，在培养的细胞中加入不同干预因素。MTT实验明确干预 时间和干预物浓度对细胞存活率的影响。应用免疫组化方法分别 KB水平的变化；PDGF。B链表达水平的变化；以及HDL的保护 作用。通过细胞脂质染色了解在各种干预条件下主动脉平滑肌细 胞对脂质摄取的不弼。应用WesternBlot技术对脆浆及胞核内 夔NF—KB进行半定量分析。 结果；在OX—LDL涮激下，大鬣盘警平滢飘缩脆存活率先下降(第8小时) 后上升(第12小时)再下降(第20小时)。在上升暗间点，郧促增 殖阶段(12小时)，免疫组织化学染色及WesternBlot结果显 B增多，其中， 示，胞浆NF—KB来见明显变化，细臆核内NF—K 10月龄大鼠SMC核内NF—KB强度较2月龄大鼠SMC变化更为 明显。若仪用LDL单一刺激，上述平滑肌细胞的核转位变化不明 显。在OX—LDL蘩|j激静蘑耩于麴入HDL作为保护嚣子，大鼠平滑魏 细胞也不出现上述变化。细胞脂质染色发现，凌ox—LDL刺激下， 细胞摄取脂质有所增加，10月龄大鼠细胞较2月龄大鼠细胞摄取 自鹭质略多。如采仅以单一LDL刺激，细胞只煞摄入少量脂质；受 HDL傺护驰缨憨受|l来霓蛸漫的脂矮摄取。在瑷上实验中，PDGF—B 链表达水平的变化不明显。 结论：大龄大鼠对氧化低密度脂爨自的刺激比较敏感，较幼龄大鼠燹容 易激活NF—K B发生核转位，从丽激活有关的细胞炎症因子的表 达，也更容易摄取劳旨质并形成泡沫细胞，可能是这一年龄段比幼 龄鼠惩容翳澎残动熬粥样硬铯瘸变的鍪要蒙嚣之一。本实验在 PDGF-B链与NF—K B活化之间没有见到明显的关联，可能由予选 取的时间点不恰当，PDGF—B链未能在氧化脂质作用12小时即有 足量表达。这些都需在今簸整体动物实验中作进一步的验证。 关键词：氧化低密度脂蛋自，核因子KB，PDGF．B链，平滑肌细胞，年 龄差剐 ABSTRACT influenceofOX—LDLonnuclear objective：Toinvestigate(1)the translocationofnuclearfactor-KBinSMCsfromratsof2and10monthsold the effectofHDLin OX—LDL respectively,andprotective against damage(2) theinfluenceof tothe OX--LDL ofPDGF--BinSMCsfromratsof2 expression and10monthsoldin age． Method：HumanLDLandHDL wereisolatedand purified usinggradual