重组干扰素上调草鱼干扰素系统基因的表达.pdfVIP

摘要 摘要 Y2402697 在硬骨鱼类的疾病防治中，近年来像抗茵肽、干扰素之类的重组蛋白的使用 越来越受观注。具有广谱抗病毒作用的干扰素可能是防治鱼病毒性疾病的一种新 途径和新方法，相对于抗生素和疫苗的使用干扰素是一种更为理想的选择。 为了研究重组干扰素对草鱼免疫保护的分子机理。本文在实验室前期克隆1 个草鱼I型干扰素基因的基础上，利用原核表达系统获得草鱼重组干扰素。草鱼 重组干扰素腹腔注射免疫健康草鱼，分别于免疫后6、12、24、48、72h检测草 鱼肝、脾、肾、肠、腮、心等组织中干扰素系统基因，包括IFN、IRF-1、IRF-7、 STAT-3、』腻PKR的表达情况。IFN表达呈现12h明显上调，24．48h达峰值， 而后下调的特点。在肾、脾、腮、肝、肠组织中上腰7表达12h明显上调，直到 72h还能维持较高水平。各组织STAl-3在6h表达明显上调，表达强烈，而后直 到72h能维持较高水平，在肾、脾、腮中表达更为强烈。MXl表达6h后上调， 12h明显被激活表达，一直持续到48h，72h有所下降。在肠和心中相对表达较 弱。PKR本底中表达较弱，6h上调并有较高水平表达，然后一直持续至72h， I：C的诱导效果相比，重组干扰素诱导 在肾、脾、腮中有较高水平表达。与Poly 草鱼干扰素系统基因表达上调更快、更强烈。在前面实验基础上，腹腔注射免疫 12h后，荧光定量检测草鱼肝、脾、肾、肠、腮、心等组织中Z刚、IRF-]、IRF-7、 STA7-3、』吼PKR的表达情况。结果显示：免疫后12h，在肝、脾、肾、腮， 肠、心组织中这6个基因表达显著增强。其中，肝脏组织中IFN、IRF-I、上限7、 中有的也有明显上调，肠中其表达量分别为1．692、3．00、3．67、4．580．881、6．81 倍；心组织中分别为1．68、6．00、1．47、1．180、1．948、5．890倍。 重组干扰素拌料投喂健康草鱼分别于投喂后12、24、48、72h，经RT．PCR 实验检测草鱼肝、脾、肾、肠、腮、心各组织中IFN的表达情况。结果显示：也 能诱导各个组织中IFN基因的表达，从表达的时序上看，也呈现先上调，然后到 一个峰值，而后下降的特点。比较各组织IFN表达特征，在肝、肾、脾、腮4 个组织中IFN基因表达更强烈，而在肠和心中表达较弱些。在此基础上，投喂后 12h荧光定量检测草鱼肝、脾、肾、肠、腮、心组织中IFN基因的表达情况。结 摘要 果也显示：各个组织中IFN基因都有表达，比较各组织IFN表达特征，在肝、 肾、脾、腮4个组织中IFN基因表达更强烈，而在肠和心中表达较弱些。 这些结果表明重组干扰素能上调草鱼上刚、职p』、IRF-7、STAT-3、MX、 PKR的表达，其将为重组干扰素的应用提供理论依据。 关键词：干扰素系统基因；免疫保护；重组干扰素；草鱼 AB A：】rIiACT ABSTRACT Inrecent attentionhas tothe USeof been years，increasing given possible recombinantsuchasantibacterialorinterferonstoreducethe proteins peptides ofvarious susceptibilityteleost todiseases．Administrationofrecombinant species fishIFNisoneofthemostefficacious methodsof a fish