12基因工程的基本操作程序解析.ppt

2、将目的基因导入动物细胞 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： * 1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 提取 棉花细胞(含抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 普通棉花(无抗虫特性) 棉花植株(有抗虫特性) 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 1、目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 2、获取目的基因的常用方法有哪些? 1)、从基因文库中获取 2)、利用PCR技术扩增 3)、人工合成 1）从基因文库中直接获取 基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库的分类: 基因组文库：一种生物的全部基因 部分基因文库：一种生物的一部分基因， 如：cDNA文库 获取目的基因的根据： 概念：PCR全称为多聚酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 前提： 原理： 方式：以_____形式式扩增，即____（n为扩增循环的次数） DNA双链复制 已知目的基因的核苷酸序列 指数 2n 2）、利用PCR技术扩增目的基因 条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、引物、热稳定DNA聚合酶 PCR(多聚酶链式反应) a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 PCR技术与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 细胞外 细胞内 热稳定DNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 目的基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 3）、人工合成的目的基因 二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心 1、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 它们各自的作用是什么? 2、基因表达载体的组成： 目的基因：外源DNA分子的有效片段； 启动子：是一段有特殊结构的DNA片断，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质； 终止子：位于基因的尾端，是一段特殊结构的DNA片断，能终止mRNA的转录； 标记基因：作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来； 质粒 DNA分子 限制酶 带有黏性末端切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 3、基因表达载体的构建： 三、将目的基因导入受体细胞 1、转化： 2、方法 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞法 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程 1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力； 原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 基因枪