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分析化学 Analytical Chemistry 7 吸光光度法Spectrophotometry 7 吸光光度法 7.1 物质对光的选择性吸收 7.2 光吸收基本定律 7.3 吸光光度法的仪器 7.4 吸光光度法分析条件的选择 7.5 光度分析的应用示例 7.1 吸光光度法基本原理 一、光的基本性质 二、物质对光的选择性吸收 一、光的基本性质 光的波动性和微粒性 单色光与复合光 互补色光 1. 光的波动性和微粒性 电磁波谱图 2. 单色光与复合光 单色光：具有同一波长的光 复合光：不同波长组成的光 可见光的波长大约在400～760nm之间，由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成，各种光具有一定的波长范围。 3. 互补色光 如果把适当颜色的两种色光按一定强度比例混合，可以组成白光，这两种色光称为互补色光。 二、物质对光的选择性吸收 物质颜色和吸收颜色的关系 吸收光谱图 1. 物质颜色和吸收颜色的关系 表7-1 物质颜色和吸收颜色的关系 2. 吸收光谱图 吸收光谱图 KMnO4溶液的吸收光谱图 7.2 光吸收基本定律 透光率与吸光度 朗伯－比耳定律 标准曲线及偏离朗伯－比耳定律的原因 1. 透光率T与吸光度A Transmittance and Absorptivity 透光率 T 与吸光度 A 的关系 2. 朗伯—比耳定律 吸光度与光程的关系 吸光度与浓度的关系 吸光度与浓度的关系 朗伯—比耳定律 Lambert-Beer’s Law 吸光系数、摩尔吸光系数 吸光系数a： 摩尔吸光系数?： 关系： ? ＝ M a 例 1 50mL比色管中，加入含有0.025mg的Fe2+溶液，加入邻二氮菲显色剂，用水稀释至50mL，用2cm比色池，在分光光度计上测得吸光度A=0.190，计算摩尔吸光系数? ？ 解： 吸光度的加合性 多组分体系中 3. 标准曲线及偏离L－B定律的原因 标准曲线（校正曲线） Standard curve，calibrated curve，working curve 例 2 用0.2160gNH4Fe(SO4)2?12H2O溶于水中稀释至500mL配制铁标准溶液，磺基水杨酸法测定微量铁，得到如下数据： 解： 偏离L-B定律的原因 朗伯-比尔定律的适用条件 单色光 应选用?max处或肩峰处测定。 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等)。 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强。 7.3 吸光光度法的仪器 一、目视比色法 二、光度计的基本部件 三、方法比较 一、目视比色法（ Colorimetry ） 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。 目视比色法 二、分光光度计的基本部件 光源 单色器 吸收池 检测系统 分光光度计的类型 单光束 双光束 双波长 三、方法比较 7.4 吸光光度法分析条件的选择 一、显色反应与显色剂 二、显色条件的选择 三、吸光度测定条件的选择 一、显色反应（ Color reaction ） 待测物质本身有较深的颜色，直接测定； 待测物质是无色或很浅的颜色，需要选适当的试剂与被测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂（color reagent）。 a. 无机显色剂 无机显色剂不多，因为生成的络合物不稳定，灵敏度和选择性也不高，目前应用不多。 如用KSCN显色测铁、钼、钨和铌；用钼酸铵显色测硅、磷和钒等。 b. 有机显色剂 有机显色剂分子中含有生色团（chromophoric group）和助色团（auxochromic group） 。 c. 多元络合物 多元络合物 三元络合物 离子缔合物 金属离子－络合剂－表面活性剂体系 杂多酸 显色反应的选择： 灵敏度高，有色物质的 k 应大于104； 选择性好，干扰少，或干扰容易消除； 有色化合物的组成恒定，化学性质稳定； 显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求两者的吸收峰波长之差Δλ（称为对比度）大于60 nm。 二、显色条件的选择 显色剂用量 酸度 显色温度 显色时间 溶剂和表面活性剂 干扰的消除 1. 显色剂的用量 M + R = MR （被测组分） （显色剂） （有色络合物） 为使显色反应进行完全，需加入过量的显色剂。但有些显色反应，显色剂加入太多，反而会引起副反应，对测定不利。 6. 干扰的消除 三、吸光度测量条件的选择 入射光波长的选择 参比溶液的选择 吸光度读数范围的选择 1. 入射光波长的选择 “最大吸收原则”