天津理工大学仪器吸光光度法要点.ppt

2 9.2 光度计及其基本部件 分光光度计的基本组成 1 光源 9.2 光度计及其基本部件 能够在所需波长范围内发出连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射180～375 nm的连续光谱。 2 单色器 9.2 光度计及其基本部件 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任意波长单色光的光学系统。它由人射和出射狭缝、反射镜和色散元件组成，其关键部分是色散元件。常用的色散元件有棱镜和光栅。 入射狭缝 准直透镜　 棱镜　　聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 800 600 500 400 9.2 光度计及其基本部件 常用的色散元件 棱镜：根据光的折射原理而将复合光色散为不同波长的单色光，它由玻璃或石英制成。玻璃棱镜用于可见光区，石英棱镜用于紫外和可见光区。 光栅：根据光的衍射和干涉原理将复合光色散为不同波长的单色光，它的分辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。 3 吸收池(比色皿) 9.2 光度计及其基本部件 使用时应注意保持清洁、透明，避免磨损透光面。 玻璃吸收池：可见光区 石英吸收池：可见光区、紫外光区 用于盛放溶液，吸收池本身应能透过所需波长的光线。 主要规格： 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0cm 注意事项： 手执非光路通过的侧面 盛放液体高度四分之三 4 检测器 9.2 光度计及其基本部件 光电转换元件，其作用是将透过吸收池的光信号强度变成可测量的电信号强度进行测量。 常用的检测器：光电管、光电二级管阵列 光电管 光电二级管阵列 9.2 光度计及其基本部件 5 信号显示系统 将信号以适当的方式显示和记录下来的装置。 常用的信号显示装置： 指针显示 LD数字显示 VGA屏幕显示 计算机显示 9.2 光度计及其基本部件 分光光度计的分类 按其光路结构可分为： 单波长分光光度计 双波长分光光度计 单波长单光束分光光度计 单波长双光束分光光度计 分光光度计 9.2 光度计及其基本部件 单波长单光束分光光度计 单波长双光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。 经单色器分光后经反射镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度。 9.2 光度计及其基本部件 双波长分光光度计 由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长（?1和?2）的单色光；利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA。 对于多组分混合物、以及存在背景干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。 9.3 显色反应及显色条件的选择 显色反应和显色剂 将被测组分转变为有色化合物的反应 显色反应 显色剂 与待测组分形成有色化合物的试剂 M无色 + R = MR有色 对显色反应的要求 选择性好,干扰少，或干扰易消除 灵敏度高 (摩尔吸光系数 104) MR稳定，组成恒定 显色化合物与显色剂的颜色差大，Δ?max 60nm 显色剂 9.3 显色反应及显色条件的选择 无机显色剂 有机显色剂 偶氮类显色剂 (偶氮胂III、PAR) 硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢 与金属离子生成的络合物不够稳定，灵敏度和选择性也不高，应用已不多。 大多数有机显色剂常与金属离子生成稳定的络合物，显色反应的选择性和灵敏度都较高，应用广泛。 三苯甲烷类 (铬天青S、二甲酚橙) 9.3 显色反应及显色条件的选择 显色条件的选择 1. 显色剂用量 2. 反应体系的酸度 在相同的实验条件下，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度。选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH范围。 作A-CR曲线，一般选择线性范围内有最大吸光度，且显色剂用量趋于平稳的点。 影响显色剂的平衡浓度和颜色 影响被测金属离子的存在状态 影响络合物的组成 3. 显色时间与温度 9.3 显色反应及显色条件的选择 4. 溶液中共存离子的影响 (2) 选择适当的显色条件以避免干扰 (3) 分离干扰离子 (4) 选择适当的测量条件，消除干扰 (1) 加入掩蔽剂 消除共存离子的干扰 9.4 吸光度测量条件的选择 无干扰，选择 ?max A ?max A ? 有干扰，根据“吸收最大、干扰最小”的原则选择波长 一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在0.15－1.0范围内。T=0.368(A=0.434)时,浓度相对误差最小。 9.4 吸光度测量条件的选择 原则：扣除比色皿、样品基体(非待测组分)和显