DNA复制与修复资料.doc

3 DNA的复制与修复 DNA双螺旋结构模型的建立为DNA自我复制机制做了初步解释，即碱基互补——两条链互补，碱基配对——模板式复制。 DNA复制中的问题 1.细胞中的DNA是在双链螺旋的基础上进一步与蛋白质形成染色质的高级结构形式存在，而复制只在单链进行。 2.在细胞周期中，DNA复制的起始和终止的调控。 3.DNA分子很长，复制起始是随机的，还是固定的？ 4.不同DNA分子如环形、线形DNA复制如何终止。 5.DNA复制的酶和蛋白因子。 6.DNA复制的保真机制。 7.DNA序列多态性的形成机制。 8.DNA损伤及修复机制。 3.1 DNA复制概述 为了保证遗传的稳定性，在每次细胞分裂之前，遗传信息载体必须精确地复制自己。 遗传信息的载体是DNA，但许多病毒的遗传信息载体是RNA而不是DNA。 3.1.1 DNA复制研究选材 原核细胞是研究DNA复制的最佳的实验系统。 ⑴细胞小，生活周期短，易在人工条件下培养，原核生物易获得各种突变体。 原核生物中的大肠杆菌是在各方面研究最深入的一种。 ⑵噬菌体（phage）是研究复制机制的一个重要实验系统。 优点：基因组小，易操作；DNA分子有线形、环形、单链和双链形式，可代表不同类型DNA的复制。如：线型，θ式，D型等复制。 已研究过的典型噬菌体系统：Phage φx174, T4 3.1.2 DNA复制的半保留性 Watson和Crick发表了DNA双螺旋模型之后又紧接着发表了DNA半保留复制（semi conservative replication model）模型，这一建立在碱基互补基础上的机制，为DNA的转录、修复、和分子杂交等奠定了基础。 DNA复制（replication）是在亲代双链DNA分子的每一条链上按碱基互补配对而准确地合成一条新的互补链，结果生成两个与亲代链相同的DNA双链的过程。 在半保留复制模型提出之前，普遍认为“蛋白质和核酸是彼此互补的，DNA自我复制过程是通过核酸和蛋白质的交替合成”。但Watson和Crick认为DNA自我复制时亲本链保持不变，但双链分成两半，每个亲本链作为复制的模板，子代双链含有一条亲本链和一条新合成的链。这就是DNA复制的半保留模型。 当时人们对半保留模型是持怀疑态度的，因双螺旋模型中存在最大的问题是双链是如何打开的？其所需的能量从何而来？Watson和Crick也承认这是“最大的问题”。 人们为了避开打开双链这个难题，又提出了全保留复制(conservative replication model)和分散(dispersive model)两个模型。 在全保留模型中两条母链彼此结合，恢复原状，新合成的两条子链彼此互补结合形成一条新的双链。在分散模型中亲代双链被切成双链片段，而这些片段又可作为新合成双链片段的模板，新、老双链片段又以某种方式聚集成“杂种链”。后来通过实验证实其中半保留模型是正确的。 DNA复制的3种假说 3.1.2.1 半保留复制 在DNA的半保留复制过程中复制区域双螺旋解旋并分开，以每条单链为模板，按碱基互补配对原则，由DNA聚合酶催化合成新的互补链，结果由一条链成为互补的两条链，这样新形成的两个DNA分子与原来的DNA分子的碱基序列完全相同。 由于每个子代DNA的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的。这种复制方式称为半保留复制(semi conservation replication)。 3.1.2.2 半保留复制的证据 ①Meselson和Stahl的实验 他们的同位素标记和密度梯度离心实验支持了半保留复制方式。 1958年Meselson和Stahl采用重同位素15N作DNA标记，而不用放射性同位素32P和14C。15N会导致DNA分子密度显著增加，这样可通过密度梯度离心将亲本链和子代链区分开来。 将大肠杆菌放在15NH4C1培养基中生长15代，使DNA被15N标记后，再将细菌移到只含有14NH4C1的培养基中培养。分别取0代、1代、2代、3代的细胞，提取DNA，进行密度梯度离心，分辨重链DNA、正常的轻链DNA和包含一条重链和一条轻链的DNA“杂种链”。 离心后从管底到管口DNA分子就停留在与其相当的CsC1密度处，紫外光下可以看到形成的区带。 14N-DNA密度较轻，停留在离管口较近的位置；15N-DNA密度较大停留在较低的位置。 当含有15N-DNA的细胞在14NH4C1培养液中培养1代后，只有一条区带介于14N-DNA与15N-DNA之间。 培养2代后则在14N-DNA区又出现一条带。有等量的“杂种链”和轻链密度。这些结果只与半保留复制模型相符。全保留模型可以排除，但分散模型却不能排除。 Meselson等又将第1代的14N/15N杂种链变性使双链分开，再将变性前后的双链和单链分别进行CsCl