植物染色体孚尔根染色法.pptVIP

实验四 植物染色体的孚尔根染色法 一、实验原理 孚尔根（Feulgen）染色法是鉴别细胞核中DNA的组织化学方法, 其原理与希夫试剂的化学性质有关。 希夫试剂是由碱性品红与亚硫酸氢钠和盐酸作用而生成的, 为无色透明的溶液, 它遇醛类物质即呈紫红色, 故可用于鉴定醛基的存在。 DNA分子结构中本身无醛基, 但在60oC1M盐酸的水解作用下, 部分地打断DNA分子中脱氧核糖与嘌呤间的糖苷键, 使嘌呤碱基脱落, 并在脱氧核糖的第一个碳原子上释放出活性醛基, 该基团遇希夫试剂即呈紫红色。 在细胞内只有DNA才具有这种反应, 故可定性地鉴定细胞核内DNA的存在。 这一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先发现和确定的, 故称孚尔根染色法。 二、实验目的 在熟悉火焰干燥法制片的基础上, 掌握弗尔根染色法, 并观察有丝分裂的各个时期 三、材料、方法、器具、药品 小麦根尖 希夫试剂， 45%醋酸， Carnoy’s固定液 碱性品红、偏重亚硫酸钠、活性炭、1M盐酸 镊子 载玻片 盖玻片 显微镜 青霉素瓶子 恒温水浴锅 四、实验步骤 希夫试剂的配制 将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中, 用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58?C左右, 过滤于棕色瓶中。 当滤液冷却至26?C时, 再加入10ml的1M盐酸和0.5g亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠(钾), 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 置于黑暗低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动, 在4?C下静置过夜, 然后过滤脱色。 染色过程 取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖材料2-3分钟。 将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在60?0.5℃的条件下水解8-10分钟。 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可过夜。 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45?醋酸, 然后盖上盖片。 压片、观察。 四、结果与分析 * 玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色 玉米染色体核型图(2n=20+2B) 玉米染色体核型图(2n=20+4B) /mnl/79/18rosado.htm Rye, Secale cereale, 2n=2x=14+2B (standard B), metaphase I pairing with 5II ring + 2II rod + 1B rod, FEULGEN staining http://www.desicca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.html http://equitationpassion.free.fr/determinisme_genetique_des_robes_des_chevaux_fichiers.htm * * * *