多聚酶链式反应扩增DNA片断-zzm解析:.ppt

多聚酶链式反应扩增DNA片断-zzm解析:.ppt

  1. 1、本文档共52页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
2、微量离心管 一种薄壁塑料管,总容积为0.5ml 3、微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体,其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。 微量离心管 微量移液器 1、准备 2、移液 (二)实验操作步骤 按照PCR反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上 用微量移液器按照PCR反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂 ①过程:盖严微量离心管口的盖子,用手指轻轻弹击管壁 ②注意: 3、混合 B、手指轻轻弹击微量离心管的管壁,目的是使反应液混合均匀 A、离心管口的盖子一定盖严,防止实验中脱落或液体外溢 将离心管放入PCR仪上,设置好PCR仪的循环程序 ①过程:将微量离心管放在离心机上,离心约10s 4、离心 5、反应 ②离心目的:使反应液体集中在离心管底部, 提高反应效果 PCR三步曲 预变性 保温 变 性 94℃ 30s 延伸 72℃ 1min 复性 55℃ 30s 94℃ 5min 72℃,1min 55℃,30s 94℃ 1min 最后1次 72℃,1min 55℃,30s 94℃,30s 30次 - - 94℃ 5min 预变性 延伸 复性 变性 循环数 PCR技术高度灵敏,为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验,PCR操作时要注意做到: 6、注意事项 ①隔离操作区,所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用必须进行高压灭菌; ②分装试剂,简化操作程序,使用一次性枪头 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 ★分子生物学研究中最强大的实验技术之一 ★其本质是在体外模拟胞内DNA分子复制的过程 美国科学家 穆利斯(K.B.Mullis) 发明了PCR技术 1993年诺贝尔奖 ㈠.DNA分子的结构 C、H、O、N、P 1.元素组成: 脱氧核苷酸 2.基本单位: 一.基础知识 脱氧核苷酸 脱氧核苷 磷酸 脱氧核糖 含氮碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤(A) 鸟嘌呤(G) 胞嘧啶(C) 胸腺嘧啶(T) 一个核苷酸上的磷酸基团上的“-OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水,形成磷酸二酯键,即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“-OH”末端称为3’端,而磷酸基团的末端称为5’端 3.多脱氧核苷酸链得形成 多脱氧核苷酸链结构简图 4.DNA分子的双螺旋结构 ⑴.DNA分子是由 的(即一条链为3’-5’,另一条链为5’-3’)脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。 ⑵. 与 交替连结,排列在外侧,构成基本骨架; 排列在链的内侧。 ⑶.两条链上的碱基通过 连结起来,形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律:即腺嘌呤一定与 配对, 一定同胞嘧啶配对。 双螺旋 两条反向平行 脱氧核糖 磷酸 碱基 氢键 胸腺嘧啶 鸟嘌呤 ㈡.DNA的复制 2.时期 有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期。 3.场所 细胞核(主要)、线粒体、叶绿体。 1.概念 由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。 4.基本条件 酶:解旋酶、DNA聚合酶 能量:ATP 原料:四种脱氧核苷酸 模板:DNA的两条链 ⑴.边解旋边复制(过程) 5.复制特点 ⑵.半保留复制(结果) 6.遵循原则: 碱基互补配对原则 7.精确复制的原因 8.复制的意义 DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代,从而保持了遗传信息的连续性 ⑴规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板 ⑵碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行 引物 DNA聚合酶 4种脱氧核苷酸 DNA母链 解旋酶 在DNA复制中的作用 参与的组分 总结:胞内DNA复制的基本体系 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 (二)PCR原理及条件 1.概念:PCR即_______________,是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的_____为模板,在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 多聚酶链式反应 DNA 2.DNA的平面结构: A G C T 5'端 3'端 氢键 A T G C 3'端: -OH端 5'端:磷酸基 团的末端 注意:1、DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3‘端延伸DNA链,因此,DNA复制需要引物 2、DNA的合成方向总是从子链的5‘端向3‘端延伸 (1)、 DNA 分子的热变性原理 DNA双链 单链 变性(加热80-100℃) 复性(缓慢冷却) 变性的目的: 复性的目的: 解开双链 有利于引物与两条单

文档评论(0)

三沙市的姑娘 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档