白僵菌的研究及其DNA的测序教程分析.docVIP

1 引言 2 1.1 白僵菌和生物防治概述 2 1.1.1 白僵菌的分类 2 1.1.2生物防治 2 1.1.3 白僵菌的生物防治 3 1.1.3.1球孢白僵菌 3 1.1.3.2布氏白僵菌 4 1.1.4 生物防治的特点 4 1.2生物防治和白僵菌的应用 4 1.2.1生物防治的应用 4 1.2.2白僵菌在生物防治中的应用 4 1.3生物防治和白僵菌的发展前景 5 2材料与方法 5 2.1材料 5 2.1.1处理方法 6 2.1.2主要仪器 6 2.1.3主要试剂 6 2.1.4培养基 7 2.2实验方法 7 2.2.1白僵菌的筛选 7 2.2.2白僵菌的纯化 8 2.2.3菌种的储存 8 2.2.4菌种的微观观察 8 2.2.5菌种的宏观观察 8 2.2.6白僵菌的分子学鉴定 8 2.2.6.1菌丝制备 8 2.2.6.2 DNA提取与纯化 9 2.2.6.3DNA浓度和质量检测 9 2.2.6.4 28S区特异性PCR程序 10 3结果与分析 11 3.1白僵菌筛选、分离及纯化的结果 11 3.2白僵菌的形态学观察 11 3.2.1宏观形态 11 3.2.2微观形态 13 3.4分子学鉴定结果与分析 14 3.4.1 DNA紫外吸收结果与分析 14 3.4.2 DNA电泳结果与分析 15 3.4.3 PCR扩增结果与分析 15 3.4.4 DNA测序的结果与分析 16 结论 16 摘要：用在合肥大蜀山采取的土样用多果定-燕麦选择性培养基筛选白僵菌，将筛选好的白僵菌在SDAY培养基上进行纯培养，以便得到纯种白僵菌。将用SDAY培养基培养的纯种白僵菌进行宏观菌落形态特征和微观孢子心态特征的观察，以便确定筛选得到的菌种为白僵菌。同时将纯化的白僵菌在10%的甘油溶液进行水液保藏。为了进一步确定筛选出来的菌种为白僵菌，提取白僵菌的DNA，并用对ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区域测序，可进一步的确定筛选的菌种为白僵菌。 关键字：白僵菌、分离纯化、形态学观察、DNA测序 1 引言 1.1 白僵菌和生物防治概述 1.1.1 白僵菌的分类 白僵菌属(Beauver Vuill．)又称波氏茵属。是Vuillemin在1921年为纪念法国真菌学家Beauveria而建立的．它是约100属虫生真菌中最常见和最重要的属之一。白僵菌的分类在过去十分混乱，因为寄主广泛，先后有多种命名方法。MacLeod（1954）仔细比较了当时已经发表的多种白僵菌属，确认该菌属只有球孢白僵菌B.bassiana（Balsamo）Vuillemin和卵孢白僵菌B.tenella（Delacr.）Siem两个种，其主要区别在于前者分生孢子多为球形，后者多为卵形。其中卵孢白僵菌的学名改为布氏白僵菌B.brongniartii（Sacc.）Petch。 1888年美国加州从澳大利亚引进澳洲瓢虫控制严重为害果园的吹绵蚜取得极大成功 ,并轰动国际昆虫学领域,由此开创了传统生物防治科学的新纪元 ,宣告一门新学科的诞生 。自此10多年来的发展生物防治无论在理论上和方法上成为具有较完整的基础理论体系和方法学的学科。1919年Smith 正式提出“通过捕食性 、寄生性天敌昆虫及病原菌的引入增殖和散放来压制另一种害虫”的传统生物防治概念。DeBach从应用生态学观点出发将其引深为“寄生性 、捕食性天敌或病原菌使另一种生物的种群密度保持在 比缺乏天敌时的平均密度更低的水平上的应用”。该定义概括了生物防治学科应用的3个基本特征：（1）利用自然界中不同生物种间的对抗作用（自然控制）；（2）天敌对有害生物种群的控制以密度方式起作用（自然平衡）；（3）天敌的控制作用是连续的和自行持续的（自然调节）。随着科学技术的不断进步,生物防治的定义与范畴得到了进一步的扩充。特别是近10年来 ，过依靠基因工程技术扩大或增强天敌品系等新技术的发展 ,更为生防增添了新内容。美国国家科学院 1987年将生物防治的定义扩大为 ：“利用自然的或经过改造的生物基因或基因产物来减少有害生物的作用 ,使其有利于有益生物如作物 、树木 、动物和益虫及微生物 。 ”这使得广义的生物防治比传统生物防治的范畴更加广泛。尽管从事生物防治的科学家及工作者均对该定义持有不同意见，而从另一侧面可看出，生物防治在逐步拓宽研究领域和向纵深发展。实际上目前国际生物防治研究与发展仍偏重于3大技术体系：（1）传统生物防治（引进天 敌控制外来害虫 、天敌昆虫的增助、散放）；（2）本地天敌的保护与利用；（3）微生物农药的研制 、开发与商品化。白僵菌时一类寄生广泛、致病性强、适应性强的昆虫病原真菌。至少有20多个国家报道过球孢白僵菌的研究和应用，是国内外研究最多、应用最广的一种昆虫病原真菌。而布氏白僵菌（卵孢白僵菌）的应用研究相对较少。 早在189