【医学课件】蛋白质浓度的测定.pptVIP

医学下载吧 * 实验三? 蛋白质定量分析  ——双缩脲法 * 【目的要求】 1.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的实验原理、技术和特点意义。 2.掌握运用标准曲线法求算待测溶液的浓度 3.进一步巩固分光光度计和刻度吸管的使用 * 【实验原理】 双缩脲反应： * * 方法 灵敏度 时间 原理 干扰物质 说明 凯氏定氮法 （Kjedahl法） 灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为 ?2％ 费时 8～10小时 将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离） 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（Biuret法） 灵敏度低 1～10mg 中速 20~30分钟 多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物 硫酸铵； Tris缓冲液； 某些氨基酸 用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50～100?g 快速 5～10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶； 各种核苷酸 用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正 Folin－酚试剂法（Lowry法） 灵敏度高 ～5?g 慢速 40～60 分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被酪氨酸和苯丙氨酸还原 硫酸铵； Tris缓冲液； 甘氨酸； 各种硫醇 耗费时