分子生物学第十一章原核基因表达的调控：教案分析.ppt

9 原核生物基因表达的调控 9.1 基因表达概述 9.2 操纵元控制理论 9.3 基因转录的时序调控 9.4 转录后加工的调控 9.5 翻译水平的调控 9.1 基因表达概述 . 9.1.2.2 诱导型表达 （inducible expression by signaling molecular） 有些基因的编码产物，只是为了满足在特定环境条件下，细胞生长的特殊要求 当环境变化时，不再需要这类产物，其基因表达活性关闭 Luxury gene 9.1.3 顺、反因子间互作方式的基因表达调控 Cis-acting element 能够影响同一条或相连DNA序列活性的特定DNA片段 例如，启动子 Trans-acting factor 一种基因的蛋白质产物，能够影响位于基因组另一条染色体上的（或基因组别处的）另一个基因的表达活性 例如，RNA聚合酶 9.1.4 基因表达的调控 结构基因 产生mRNA,合成蛋白质 操纵位点 promotor,operator：启动子结合位点 调节基因 产生阻遏蛋白（与操纵位点结合） →结构基因不转录 诱导物存在时，可与阻遏蛋白结合 →结构基因转录 9.2.1 乳糖操纵元 lactose operon 9.2.1.1 酶的诱导现象 1。结构 分解底物的酶只有在底物存在时才出现 2。酶的诱导现象 无乳糖时，几个B-gal/cell 加入乳糖时，5000个 再去掉乳糖，lac mRNA下降 乳糖能激发lac mRNA的合成 乳糖的诱导作用是由酶前体转化而来，还是诱导新酶合成？ 培养基（35S-aa, 无乳糖）→ E.coli繁殖 培养基（无35S -aa, 加入乳糖） → β-gal(无35S) 9.2.1.2 调控机理 1 调控区结构 lacI, 1045bp，独立Pi P, 82bp，－82～＋1 O, 35bp，－7～＋28 lacZYA 体外结合竞争实验: 阻遏物＋RNA pol, off 2. 阻遏状态 3 诱导状态 4 诱导物不是乳糖 gratuitous inducer  安慰诱导物 义务诱导物 可诱导半乳糖苷酶产生，但不是其底物 IPTG，异丙基半乳糖苷 TMG ，巯甲基半乳糖苷 ONPG, O-硝基半乳糖苷 9.2.1.3 阻遏蛋白的作用机制 1 阻遏蛋白结构 38KD，4 聚体， 一个亚基结合一个IPTG分子 lacI 组成型转录 Pi 弱启动子， 5－10个／cell 具有二重性 阻止转录（与lacO结合） 开始转录（与诱导物结合） 阻遏蛋白的结构域 头段，-NH2端，lacO结合区 绞链区 核心段，-COOH， 诱导物结合区 4个亚基的核心片段接触形成四聚体 TGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACA ACAACACACCTTAACACTCGCCTATTGTTAAAGTGTGT +1 +10 +20 无诱导物存在时，细胞内不存在游离的阻遏蛋白四聚体 一个四聚体特异结合在lacO 其他四聚体随机结合 加入诱导物后 诱导物～阻遏蛋白 → 变构 →阻遏蛋白与lacO亲合力下降 →结构基因转录 诱导物代谢完毕，一个四聚体回到lacO 4 阻遏蛋白对RNA pol功能的影响 阻遏蛋白和RNA pol可同时与DNA结合 平衡常数 1.