盐度对地衣芽胞杆菌产淀粉酶活力的影响1.docVIP

盐度对产淀粉酶活力的影响地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）能够将水体中有机物分解为小分子的有机酸、氨基酸等物质，因此，它是水产养殖系统中最有效地水质净化菌种之一株野生型地衣芽孢杆菌热带种株产酶活性在温度为30℃、pH 盐度0～0 (以10度为梯度差)时酶活性～地衣芽孢杆菌酶 近年来，高密度、规模化、工厂化的水产养殖方式在世界各地得到了蓬勃发展，这在很大程度上满足了人们对水产品的需求，解决了自然渔业资源相对短缺的矛盾，但肥料养殖残饵、排泄物、生物残体等导致了养殖水体理化环境的恶化，这已成为目前水产动物病害的种类、数目范围日益增加及危害程度的重要原因。以芽孢杆菌为主的有益微生物制剂可通过调节水体生态环境，从而达到避免环境恶化、药物残留和废弃物污染的水质净化目的，减少病害的发生，可明显提高养殖动物的成活率、增重率和水产品的品质，在无公害绿色养殖、扩大水产品出口方面及其重要的作用。其中芽孢杆菌对人畜无毒无害，在自然界分布广泛，增殖后产生的许多胞外酶能把生物残体饲料残饵养殖中的淀粉、蛋白质、脂肪等有机质分解而达到养殖水体富营养化。 。1 材料与方法 1.1 野生型菌株为分离筛选的株高淀粉酶活地衣芽孢杆菌1、8、18、27、Pb -wc09002、Pb -wc09006、Pb -wc09001、Pb -wc09005、Pb -hk09002；对照菌株Pb-sp09001和Pb-sp09003（分离自目前海南最常用的两种商品化的地衣芽胞杆菌制剂）。 1.1.2 培养基 可溶性淀粉10g、蛋白胨10g、牛肉膏5g、K2PO4 0.35g、灭菌陈海水1000mL、121℃高压灭菌30min 1.1.3 试剂 无菌脱脂奶粉（内蒙古伊利实业集团股份有限公司）、pH标准缓冲溶液（金测分析技术（天津）有限公司）、NaCl（国药集团化学试剂北京有限公司）、大粒氧速效增氧剂（广东省湛江市麻章区绿海生物科技有限公司）。 1. 方法1.2.1 盐度对菌株产淀粉酶活力的影响 （1）上清液制备 配置发酵培养基100ml（其中灭菌陈海水由蒸馏水和氯化钠代替），用蒸馏水和氯化钠来调节其盐度差，依次设置6个盐度梯度（依次为0、10、20、30、40、50），分别盛装于15ml的试管中，每管各5ml。于121℃高压灭菌20min，冷却至常温后，将第一节中分离筛选纯化的保藏菌种按1%的接种量依次接种于以上不同盐度梯度的培养基中，30℃ 200rpm/min振荡培养24h，以6000rpm/min离心10min，收集上清液各10mL，并用0.20 μm滤膜过滤除菌。 （2）加样 将此无菌上清液滴加于制备好的平板筛选培养基孔内(孔径4mm、每孔25 μl)，用封口胶将平板封闭以保持湿度，并置于30℃孵箱内孵育24h。其中每个样品（每株菌株的上清液）做3个重复（即点3个孔）。 （3）淀粉酶活测定[15] 将稀碘液（工作液）喷雾在上述已经孵育好的培养基上进行染色。然后置于4℃冰箱4h后，用游标卡尺测量点样孔周边透明环的直径d。记录实验结果。 结果与分析 由统计结果分析得到，不同盐度梯度（盐度值依次为：0.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0、60.0）培养基培养下，这些菌株所获得的细菌培养液所行成的淀粉酶水解圈直径之间存在极显著差异(P0.01)而在相同盐度的培养基发酵条件下，不同菌株之间形成的淀粉酶水解圈直径亦存在极显著差异(P0.01)。 从表可以看出，同一菌株在不同盐度梯度培养基培养下，培养液淀粉酶水解圈直径具体如下：Pb-wc09002在盐度20.0～60.0之间均能形成淀粉酶水解圈，其淀粉酶水解圈直径在12.3mm～15.9mm之间，其中当盐度在30.0～60.0之间水解透明圈都比较大，以盐度为60.0时为最大，透明圈直径达15.9mm，而在盐度为20.0时水解透明圈直径最小，仅为12.3mm，而当盐度在0～20.0之间时并无成水解透明圈形成；菌株27在盐度30.0～50.0之间均能形成淀粉酶水解圈，其淀粉酶水解圈直径在16.3mm～25.1mm之间，其中以盐度为40.0时为最大，水解透明圈直径达25.1mm，而当盐度在0～30.0之间及50.0～60.0之间时并不形成淀粉酶水解圈；Pb-wc09006在盐度10.0～40.0之间均能形成淀粉酶水解圈，其淀粉酶水解圈直径在10.3mm～18.7mm之间，其中当盐度在30.0～40.0之间水解透明圈都直径比较大，以盐度40.0时为最大，透明圈直径达18.7mm，而当盐度在10～10.0之间和40.0～60.0时并无成水解透明圈形成；Pb-wc09001在盐度10.0～60.0之间均能形成淀粉酶水解圈，其淀粉酶水解圈直径在 18.3mm～26.1mm之间，其中当