紫外可见分光光度法综述.pptVIP

紫外—可见分光光度法 目 录 紫外可见光谱学原理和应用 仪 器 样品处理及测定 方 法 二极管分光光度计的特性 1.基本原理 电磁波谱：无线电波、红外线、宇宙射线、x射线、紫外线、可见光 波长范围：200-800nm 波长和频率： E=h ν ν =c / λ λ 越短，E越高 紫外—可见光谱的来源： 辐射作用于物质，发生反射、散射、吸收、荧光、磷光、光化学反应。通常测量紫外—可见光谱时我们希望只发生吸收。 分子内电子跃迁导致谱带变宽，产生吸收光谱 2. 定性分析： 鉴定谱图和结构 同一性的认证 颜 色 其他定性信息 蛋白质的熔点测定 酶活性 3. 定量分析： 朗伯—比尔定律： A = εb c (ε为摩尔吸光系数) 多组分的分析 叠加性原理：一种混合物在任何波长下的吸光率 等与混合物中各组分在该波长下的A之和。 浓溶液的不适用性 化学偏离与仪器偏离 4. 间接测量： 化学衍生法 分光广度滴定 酶动力学分析 1.仪器设计 分光光度计的组成 产生一定光谱宽度的电磁辐射光源 色散装置：从光源发射宽的电磁波中选择特定的波长 样品