现代生物技术在污染物处理中的应用课件.pptVIP

 现代生物技术在废水生物处理中的应用及其风险 一、几个概念1.生物处理的范畴：生物降解、生物转化、生物吸附、生物絮凝2.所涉及到的现代生物技术遗传工程技术，现代酶工程，细胞工程，现代发酵工程 二、生物降解的局限性 （1）没有一种微生物可以降解所有的有机废物。污染物包含各种化学物质，一种微生物也许只能降解混合物的一种成分，而且可能受到别的成分抑制 （2）有些恶劣环境条件可以抑制微生物的降解活性或生长 （3）许多非极性的化合物可能会吸附在土壤和沉淀物上,使生物难以降解。 （4）微生物降解某些有机物效率较低? 可能的解决方案之一：现代生物技术(遗传操作技术）  1. 质粒转移技术（DNA重组技术） （1）在同时降解多种有机污染物中的应用 CAM(降解樟脑)质粒通过接合作用转入带有OCT(降解辛烷)质粒粒的一种菌株，这两种质粒是不相容的，不能在同一细胞中共存。然而，当两种质粒之间发生重组时，产生的重组质粒不仅可以存在并且携带CAM和OCT的降解活性。 NAH(降解萘)质粒通过接合作用转入带有XYL(降解二甲苯)质粒的菌株。NAH和XYL质粒是相容的，因此能在同一宿主细胞中共存。 最后，CAM/OCT融合质粒通过接合作用转入带有NAH和XYL质粒的菌株中。结果该菌株的后代在天然的石油上生长得比任何一种只带一种质粒或两种质粒的菌株好。 ? 图 2. 降解樟脑、辛烷、二甲苯、萘的菌株的构建 含有降解樟脑质粒的菌株A，与含有降解辛烷质粒的菌株B接合，质粒转移并发生同源重组，产生一个带有降解樟脑和辛烷的融合质粒的菌株E。含有降解二甲苯质粒的菌株C，与含有降解萘质粒的菌株D接合，产生一个带有降解二甲苯质粒和降解萘质粒的菌株F。菌株E和F接合产生一个菌株G，它携带有一个降解樟脑和辛烷的融合质粒，一个降解二甲苯质粒和一个降解萘质粒。 （2）在低温下降解有机污染物中的应用大多数通过质粒转移进行基因操作的具有降解性能的细菌是嗜温细菌，这些微生物只有在20℃～40℃才可以良好生长。但是被污染的河流、湖泊、海洋通常只有0～20℃。一种从嗜温性菌株恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida)中的ToL(降解甲苯)质粒通过接合作用转入一种耐寒的恶臭假单孢菌。该菌原本可以在0℃时降解水杨酸，并且能将其作为唯一的碳源，但不降解甲苯。转化株携带有转入的TOL质粒和它自身的SAL质粒（降解水杨酸），可以在0℃时利用水杨酸或者甲苯作为唯一的碳源(表 2)，而野生型(未转化)的耐寒恶臭假单孢菌在以甲苯作为唯一碳源的条件下，任何温度都不能生长 表2. 不同温度下以水杨酸或甲苯为唯一碳源时野生型（非转化）和转化的耐寒恶臭假单孢菌P. putida的传代时间? (3) 放射环境中降解有机污染物 射线对大多数微生物细胞都具有杀灭作用, 因此在放射环境中处理有机物染物的细菌必须具有抗射线的能力. 非致病土壤细菌耐辐射球菌Deinococcus radiodurans对高水平的放射有天然抵抗作用。这种抵抗作用归功于其对DNA的修复能力，它对于DNA损伤的修复非常有效。而且，任何导入该耐辐射球菌的外源DNA，不管是以质粒的形式还是插入到染色体上，都能抵抗高剂量的辐射。由于这种细菌能在持续放射性污染物的有毒环境中表达生物清除蛋白,因此是理想的候选细菌。图（3）显示了Deinococcus radiodurans对放射线的抵抗能力。 图3.γ射线对大肠杆菌和耐辐射球菌的影响 具体操作 将带编码甲苯双加氧酶基因的质粒转入耐辐射球菌,再通过同源重组单交换，将整个质粒插入耐辐射球菌的染色体中。整合的甲苯双氧化酶基因赋予耐辐射球菌降解甲苯的能力，而不受环境辐射的影响. 甲苯双加氧酶含有几种蛋白成份，并需要金属和有机辅因子。它的成功表达预示了其它不甚复杂的生物降解酶系统也可以在耐辐射球菌中进行表达。由于耐辐射球菌可以忍耐高水平的射线，一旦这种细菌工程化后表达相应的生物降解途径，就可以在放射环境中降解响应的有机污染物。 2. 基因突变技术 通过质粒转移（重组）,将各种具有完整降解途径的质粒通过接合作用连接起来，这只是构建具有新功能的细菌的方式之一。 通过降解途径的基因突变以提高降解能力，或赋予新的特性是另一条途径。这个方案的可行性在质粒pWWO上的二甲苯、甲苯降解途径中得到验证。这种编码间位开环(meta-cleavage)途径的质粒包含12种不同的基因，能使带有该质粒的假单孢菌类利用各种苯甲酸烷基酯(alkylbenzoates)作为碳源 。甲苯降解及