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(一)estern-blot实验
1. estern blot主要实验试剂
溴酚蓝(Bromphenol Blue)
丽春红(Ponceau S)
考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue R-250)
吐温-20(Tween-20)
β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)
十二烷基硫酸钠(SDS )
过硫酸铵(APS)
TEMED
聚丙烯酰胺凝胶单体贮备溶液
4×浓缩胶缓冲液
4×浓缩胶缓冲液
甘氨酸
Tris碱
脱脂奶粉
牛血清白蛋白(BSA)
硝酸纤维素膜(NC膜)
蛋白质Marker和预染 Marker
通用蛋白裂解/提取试剂
BCA法蛋白定量试剂盒
Bradford法蛋白定量试剂盒
兔源性抗抗体
辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG
ECL超敏发光液
定影液、显影液、X光胶片曝光盒
其他试剂(乙醇、甲醇、冰醋酸、二甲苯、戊二醛等)
2. Western-blot主要实验试剂的配制方法
(1)10%SDS溶液: SDS粉末1g,加双蒸水10mL使其溶解,室温保存。
(2)10%APS:APS 20mg,加双蒸水200μL,混匀,现配现用。
(3)10×电极缓冲液(PH8.3): SDS粉末10g、Tris碱30.4g、甘氨酸144g,双蒸水定溶至1000mL,4℃保存,用时10倍稀释。
(4)考马斯亮蓝固定液:乙醇500mL、冰醋酸10mL、双蒸水定溶至1000mL。
(5)考马斯亮蓝脱色溶液:95%乙醇250mL、冰醋酸80mL,双蒸水定溶至1000mL。
(6)考马斯亮蓝染色溶液:0.29g考马斯亮蓝,溶解于250mL脱色液中,过滤后室温保存。
(7)转移缓冲液:甘氨酸2.93g、Tris碱5.812g、甲醇200mL、去离子水定溶至1000mL,4℃保存。
(8)10×TBS溶液:Nacl87.75g、Tris碱12.1g,用双蒸水溶至1000mL,4℃保存,用时10倍稀释。
(9)TBST溶液: 1×TBS溶液1000mL、Tween-20溶液1mL,混匀。
(9)丽春红溶液:100g丽春红,5mL冰醋酸,双蒸水定溶至100mL,室温保存。
(11)5×上样缓冲液:1mol/LTris-HCl(pH6.8) 0.6mL、甘油2.5mL、10% SDS溶液2mL、β-巯基乙醇(使用前加)0.5mL、1%溴酚蓝溶液1mL,去离子水定溶至10mL,4℃保存。
(12)12%分离胶:聚丙烯酰胺单体贮备液3.2mL、4×分离胶缓冲液0.5mL、10%SDS溶液80μL、10%APS溶液25μL、TEMED原液10μL、双蒸水溶至8mL。
(13)5%浓缩胶:聚丙烯酰胺单体贮备液0.68mL、4×浓缩胶贮备液0.25mL、10%SDS溶液40μL、10%APS
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