第五章酶的非水相催化to学生分析报告.pptVIP

第五章 非水相生物催化 酶的非水相催化体系 有机介质中的酶催化： 1、微水有机介质体系、 2、与水溶性有机溶剂组成的均一体系、 3、胶束和反胶束体系； 气相介质中的酶催化体系 超临界流体介质中的酶催化体系 离子液介质中的酶催化体系 有机介质中的酶催化 1、微水有机介质：由有机溶剂和微量的水组成的反应体系。微量的水主要是酶分子的结合水，它对维持酶分子的空间构象和催化活性至关重要。另外一部分水分布在有机溶剂中。 2、与水溶性有机溶剂组成的均一体系：由水和极性较大的有机溶剂互溶组成的反应体系，水和溶剂含量均较大，酶和底物以溶解状态存在于均一体系。 3、胶束和反胶束体系： 胶束又称正胶束或正胶团，是在大量水溶液中含有少量与水不相混溶的有机溶剂，加入表面活性剂后形成的”水包油”型的微小液滴。反应时，酶在胶束外面的水溶液中，疏水性的底物或产物在胶束的内部。反应在胶束的两相界面中进行。 反胶束 气相介质中的酶催化体系 气相介质中的酶催化反应是指酶在气体或者能够转化为气体物质的酶催化反应。气体介质密度低，扩散容易。 超临界流体介质中的酶催化体系 超临界流体:温度和压力均在本身的临界点以上的高密度流体， 具有和液体同样的凝聚力、溶解力； 扩散系数又接近于气体，是通常液体的近百倍。 超临界流体的有关性质（P-V-T） 超临界酶催化的特点 流体对酶结构无破坏作用； 良好的化学稳定性； 对设备无腐蚀作用； 超临界温度最宜在室温或酶的适宜催化温度； 超临界压力不宜太高，节约压缩动力费用。 离子液介质中的酶催化体系 离子液体：由体积相对较大、不对称的有机阳离子和体积相对较小的无机阴离子组合而成的物质，又称液体熔盐。 “零”蒸汽压、非挥发性、低熔点（100C）、宽液程、高热稳定性、良好的透光性等优点。 能提高酶的活性和选择性、提高酶的热稳定性。 非水相介质(有机相)中的酶学性质 1、酶在有机溶剂中之所以能发挥催化功能是因为在有机溶剂体系中能够保持整体结构和活性中心的完整性。 2、有机溶剂在很大程度上也会影响酶的稳定性和酶底物的特异性。 3、由于有机溶剂改变了疏水相互作用间的精细平衡，从而影响酶的结合部位，改变了底物的存在状态 ，使得自由能改变，影响酶的底物特异性、立体选择性、区域选择性和催化功能等。 1.非水相介质中酶的热力学稳定性 试验证明：有机溶剂中酶的热稳定性和储存稳定性都比水溶液中高。 例如：猪胰脂肪酶(PPL)在苯中催化脂交换反应。有机相中100C半衰期10h以上，而在水相中100C马上失活。 原因：有机溶剂中缺少使酶失活的水分子，而水会引起酶分子中一些氨基酸的脱氨基、水解、二硫健的破坏、半胱氨酸的氧化、AA异构化等蛋白质热失活使得热不稳定。 有机介质中酶热稳定性提高：酶结构刚性增强和水含量有限。 水溶液中，酶分子亲水区位于酶表面，官能团与水溶液的水分子形成氢键，使蛋白质具有“柔性”的开放结构；有机介质中，酶的疏水区暴露出来，带电基团的相互作用是酶蛋白活性的“封闭”构象，酶分子的刚性增强，对受热而引起起的折叠抗性增强，热稳定性提高。 水是酶分子变性的主要参与者，含水量的减少会使变性受到抑制，从而提高酶的热稳定性。 2.非水相中酶的底物特异性（1/2） 酶与底物的特异性结合取决于：酶-底物结合能和酶、底物及溶剂相互作用能的能差，因此酶与底物的结合受溶剂的影响： 如凝乳蛋白酶催化N-乙酰AA酯水解反应(AA:疏水的苯丙氨酸/亲水的丝氨酸)： 水溶液中，苯丙氨酸乙酰酯的水解速度是丝氨酸乙酰酯的5X104倍， 辛烷中，丝氨酸酯的水解速度快3倍。 原因： 水溶液中，酶与底物的结合主要是疏水作用， 有机相中，这种疏水作用已不重要。 酶能够利用与底物结合的自由能来加速反应，总的结合能的变化是酶-底物结合能和酶-水分子结合能的差值。 因此，介质改变时，酶的底物专一性（Kcat/Km）和催化效率会发生改变。 2.非水相中酶的底物特异性（2/2） 另一方面，底物/反应介质与酶活性中心之间分配的变化，也是影响酶的底物专一性及催化效率的因素之一，而底物和介质的疏水性直接影响底物在两者之间的分配。 3.非水相酶的对映选择性（1/2） （1）.酶的对映选择性使指酶识别外消旋化合物中某种构象对映体的能力，这种选择性是由于酶和两种对映体形成复合物的能量差造成的。 （2）.有机溶剂中酶对底物的对映体选择性随着介质的亲、疏水性的变化而变化。有机溶剂中酶的立体选择性降低是由于底物的两种对映体把水分子从酶分子的疏水结合位点置换出来的能力不同。总的结果是酶的立体选择性随介质疏水性增加而降低。 3.非水相酶的对映选择性（2/2） （3）.溶剂的几何形状也影响酶的对映体选择性。一般来讲增加体系的水含量会提高酶的对映体选择性。因为增加体系水含量，在某种程度上会使酶恢复