电子科大细胞生物学第三章细胞生物学研究方法分析报告.pptVIP

1、普通光学显微镜技术 2、荧光显微镜技术 ?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 （Laser Scanning Confocal Microscopy） 物镜和聚光镜同时聚焦到同一小点，彼此互相共聚焦。激光束（光源）经双色镜反射后，通过物镜汇聚到样品某一焦点。从焦点发射的荧光（样 是研究膜蛋白或膜脂流动性的基本实验技术之一。 荧光素标记膜蛋白或膜脂，然后用激光束照射细胞表面某一区域，使被照射区的荧光淬灭变暗。由于膜的流动性，淬灭区域的亮度逐渐增加，最后恢复到与周围的荧光强度相等。根据荧光恢复的速度可推算出膜蛋白或膜脂扩散速度。 （1）透射电镜基本构造 ? 离心分离技术 ? 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ? 特异蛋白抗原的定位与定性 ? 细胞内特异核酸的定位与定性 ? 放射自显影技术 ? 定量细胞化学分析技术 ? 细胞的培养 ? 细胞工程 一、细胞的培养 ? 类型： 原代培养细胞（primary culture cell） 继代培养细胞（sub-culture cell） ? 细胞株（cell strain）: 正常二倍体，接触抑制（是指细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象） ? 细胞系（cell line）： 亚二倍体，接触抑制丧失 细胞培养 细胞分化的定向诱导 细胞融合 显微注射等 免疫小鼠获得小鼠脾细胞（B淋巴细胞）。之后，用小鼠骨髓瘤细胞与免疫过小鼠的脾细胞在PEG或灭活病毒介导下发生融合。融合后的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，既可分泌抗体，也可像肿瘤细胞一样，可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖，从而分泌大量单克隆抗体。 本技术最主要优点：可用不纯的抗原分子制备纯一的单克隆抗体。因为可从产生各种不同抗体的各种杂交瘤混合细胞群体中筛选出产生特异抗体的杂交瘤细胞珠。 由能进行无限次传代培养的细胞群称为细胞系。细胞系细胞与体内原来的细胞比，其形态、结构、遗传上存在不同程度的变异。 细胞系（cell line）： 细胞系细胞的特点是染色体明显改变，一般呈亚二倍体或非整倍体，接触抑制丧失，容易传代培养。如Hela细胞系、BHK21细胞系、CHO细胞系等。 Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养 1、贴附型细胞 （1）成纤维细胞型细胞 细胞长梭形,核圆位中央,胞质常外伸2-3个长短突起,多数细胞排列疏散,有较大细胞间隙,有时也相互平行排列，成群细胞呈放射状、旋涡状等形式。 （2）上皮型细胞 类似上皮细胞而故名。细胞扁平状，排列较规则，贴壁后呈三角形及不规则扁平多角形，中央有偏圆形核，生长时彼此紧密连接成单层细胞，相互拥挤呈现“铺路石块状”，局部可形成单层上皮“膜片组织”。 （3）游走型细胞 在支持物分散生长，一般不连接成片形成群落；细胞质常伸出伪足和突起；在培养皿壁上生长位置不固定，呈活跃的游走和变形运动，速度快且方向不规则；细胞内易出现色暗吞噬颗粒；细胞外形不规则且多变，细胞密度增大连接成片时，形状类似成纤维细胞型或上皮细胞型。 （4）多形型细胞 常见形式：神经细胞和神经胶质细胞。 细胞多形不规则。其不规则形态不象成纤维细胞那样由胞质突起所致，而是一般分胞体和胞突两部分，胞突细长，胞体多形不规则。 2、非贴附型细胞 细胞体外生长时不贴壁，在悬浮培养液中生长而故名，又称悬浮型细胞。细胞呈球形。 常见形式：血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交细胞、转化细胞系等。 培养时，细胞密度大，培养效率高，操作方便，易于大规模生产。 （1）单倍体细胞培养： 用花药在人工培养基上进行培养。可以从小孢子（雄性生殖细胞）直接发育成胚状体，然后长成单倍体植株；也可通过愈伤组织诱导分化出芽和根，最终长成植株。 （2）原生质体培养 （二倍体体细胞培养）： 用纤维素酶去掉细胞壁得到原生质体，后者在无菌条件下生长分裂，经诱导分化最终长成植株。也可通过不同植物的原生质体进行融合的体细胞杂交长成体细胞杂交植株。 植物细胞培养 二、细胞工程 细胞工程使用的主要技术有： 融合细胞（杂交细胞）在培养过程中会发生染色体丢失。 凡亲本细胞亲缘关系比较近的，连续培养中染色体丢失慢。人、鼠杂交细胞中，人的染色体丢失很快。 细胞融合（cell fusion）与细胞杂交（cell hybri