细胞凋亡小泡和CD8T细胞的交联.docVIP

细胞凋亡小泡与CD8 T细胞的交联,及对肺结核防预 摘要 CD8 T淋巴细胞在对抗结核分枝杆菌的预防免疫中起到重要的作用。最近,我们描述了一条在肺结核中CD8T细胞活化的迂回途径，该途径通过来自被感染细胞的细胞凋亡小泡调节，将分枝杆菌性抗原运输到树突细胞(DCs)。这里我们证实在体内，来自分支杆菌感染的巨噬细胞的凋亡小泡,刺激CD8 T细胞。DCs来消耗淋巴结的自导严格要求有效的交联。经核内体内为主的蛋白酶体处理发现在受体DCs中小泡-相关抗原随后死亡。此外，囊泡加工取决于脂结合蛋白得存在来使凋亡膜解体。通过Toll-样受体（TLR）刺激，凋亡小囊泡显示有效的辅助活性。最后，从受感染的细胞接种囊性小泡诱导防预多发性结核感染。综上所诉,我们提出这个迂回路径来代表调节 CD8 T细胞在体内的交联及对肺结核的防预的一个真正的免疫学机制。 介绍 　　肺结核是最常见的全世界性细菌感染疾病。免疫对抗它的病原学作用者，结核分枝杆菌，主要涉及CD4 T细胞。然而,CD8 T细胞在保护预防结核病起着至关重要的作用,因为缺乏CD8 T细胞造成对分枝杆菌的攻击更高的易感性。分枝杆菌性肺结核主要感染肺部的巨噬细胞。感染后，分枝杆菌定居在早期吞噬小体内并通过抑制吞噬小体成熟及抑制与溶酶体融合而逃避免疫系统。此外,分枝杆菌抗原在吞噬小体内被隔离,不能穿越进入胞浆。由于CD8 T细胞识别源于细胞质的抗原并使抗原沿MHC-I抗原-表达路径被处理,关键问题一直是CD8 T细胞如何遇到各自分枝杆菌性抗原表位。先前的工作描述在结核病中CD8 T细胞的活化这条迂回途径来克服这一障碍。因此,分枝杆菌诱导被感染的巨噬细胞的细胞凋亡，随后释放含自分枝杆菌抗原的凋亡小泡。这些小泡被DCs吞没，加工处理抗原物为后续提供给CD8 T细胞。因此,这条迂回路径代表了 CD8 T细胞通过吞噬小体-封闭的抗原活化的专用机制。 最初,在病毒性感染中发现细胞凋亡和T细胞的活化的关系，病毒性感染中将死的被感染细胞通过共培养的DCs促进CD8 T细胞启动。这一机制涉及从含有抗原供体细胞到受体细胞的转移,最终调节抗原呈递,这一机制被称之为与T细胞的活化相关的交叉呈递或交联。这条迂回路径包括经典交联,后者被证实为多种肿瘤和感染模式。几种病原体包括沙门氏菌和志贺氏菌诱导感染宿主细胞的细胞凋亡。然而,凋亡小泡作为交联剂,还不能确定在这些模型系统中。不同的模式可以解释交联的机理。最新数据显示,抗原呈递细胞(APC)的吞噬小体配备完整的分子装置,要求MHC-I限制性抗原呈递包括抗原呈递相关的转运（TAP）,肽加载复杂,及邻近的蛋白酶体。这表明吞噬小体组成一种自主细胞器，通过主要细胞便利直接的交叉呈递。然而,新的研究不能证实这些结论。 因为这条迂回路径是在人类的体外系统中发现,就炎症性过程而言，交联 CD8 T细胞仅仅能代表旁观者通过周围DCs接受，凋亡小泡的活化。研究凋亡小泡路径是否反映了真正的免疫学机制，即在周围组织中通过DCs小泡的跨越摄取，随后移动至耗竭的淋巴结,并且在淋巴组织启动T细胞，我们建立了抗原特异性体内模型。为此,我们使用重组分枝杆菌卡介苗（BCG-OVA）来感染的巨噬细胞。由于宿主细胞固有侵染诱导的凋亡的抑制，我们认为通过被感染的APCs细胞死亡后囊泡形成的外在控制作为最可靠的方法。我们通过来自被感染巨噬细胞的细胞凋亡小泡使小鼠免疫，并采纳性地转移OVA特异性TCR-转基因CD8 T细胞到受体细胞,继而分析CD8 T细胞体内活性。 　结果 　　 　　分枝杆菌诱导凋亡小泡 　　巨噬细胞感染后，分枝杆菌引起宿主细胞调控的细胞死亡。为了将细胞凋亡形象化，用重组BCG-OVA感染后，我们进行了鼠科的巨噬细胞的Annexin V染色。它将Annexin V 绑定于磷脂酰丝氨酸典型地暴露在凋亡膜的外部小叶。图1A揭示BCG-OVA-感染的巨噬细胞的Annexin V染色的红色荧光,标志细胞凋亡相较于非感染细胞。包括星孢菌素在内，作为凋亡细胞死亡的调控,激活半胱天冬酶-3以及随后的细胞凋亡级联。 　　扫描电镜(SEM)显示了经历了侵染诱导的细胞凋亡的巨噬细胞的囊泡形成(图1B)。值得一提的是,垂死的巨噬细胞通过出芽于细胞索的细胞凋亡小泡表现出一系列显型(图1B,中部)。巨噬细胞的不同超速离心法导致同源的囊泡制备如同SEM指示(图1B,底部)。 为检测重组BCG(卡介苗)替代的抗原使否存在于凋亡小泡中,我们通过单克隆抗体对抗卵白蛋白进行了囊泡蛋白质的蛋白印迹。卡介苗表达相当于卵细胞碎片(氨基酸230-359)的w12 kDa带,这些带在来自未感染的巨噬细胞得凋亡小泡中不存在(图1C)。综上所诉,凋亡小泡的产生包括来自BCG-OVA-感染的巨噬细胞的替代抗原证明是完全具有功能的。 　　通过凋亡小泡的CD8