生物制品学实验指导.doc

生物制品学实验指导 目录： 实验一：细菌的划线分离与纯培养 实验二：动物的免疫与接种 实验三：灭活疫苗的制备 实验四：凝集抗原的制备 实验五：平板凝集试验 实验六：病料的采集与鸡胚接种 实验七：病毒的收集及效价的测定 实验八：抗原及疫苗的制备 实验九：动物的免疫与接种 实验十：抗体水平的检测 实验一：细菌的划线分离与纯培养 实验二：动物的免疫与接种 一：目的与要求： 1熟悉细菌划线分离的方法及纯培养的意义1所示划线，37℃条件下培养24h。 图1 细菌分离培养的划线法—30亿的灭活菌液，置37℃温箱24h，并加入结晶紫用于诊断抗原。 2．铝胶苗的制备（示教）（1）氢氧化铝胶的制备： ① 硫酸铝钾与蒸馏水按1：10混合，60℃加热溶解 ②浓氨水与蒸馏水1：5混合，将② 缓慢加入①中，并不断搅拌，加至PH 7.0~7.2，静置弃上清，用蒸馏水洗3~4次，每次均静置弃上清，测定PH，分装，高压后备用。 （2）将灭活后的菌液与氢氧化铝胶按5：1混合，并分装。取样做安检（接种普通琼脂培养基，37℃，1~2d ；或接种小白鼠）。 准备 名称 班组 数量 总计 备注 接种环、酒精灯、灭菌滴管、灭菌盐水、0.4%甲醛灭菌盐水 离心机、离心管、比浊管、硫酸铝钾、氢氧化铝胶、结晶紫 实验五 平板凝集实验 目的与要求 1．掌握实验动物采血的基本方法 2．掌握平板凝集试验的操作方法与结果判定 二：实验内容 1．家兔的耳缘静脉或心脏采血（略） 2．练习小白鼠尾静脉及眼眶静脉采血法并分离血清 3．血清平板凝集试验与结果判定 取洁净玻片一快，用玻璃铅笔划成小格，并做记号。将待检血清1～2滴滴于洁净玻片上，取已知平板凝聚抗原，加入其中并混合均匀，数分钟后若有可见的凝集现象即为阳性反应。此法简单迅速，常用于细菌鉴定或畜禽传染病的诊断，如布氏杆菌及鸡白痢等。 准备 名称 班组 数量 总计 备注 微量移液器 5 1 5 枪头 小白鼠 5 2 10 玻片 5 1 5 标准阳性对照 抗原、镊子、 实验六：病料的采集与鸡胚接种 目的与要求 了解病料的采集与病毒的分离。 掌握鸡胚接种的方法。 二：实验内容 1．病料的处理：用无菌盐水清洗表面的血渍，灭菌剪刀剪碎以1：10稀释后盛入无菌瓶内并加入双抗反复冻融四次。（示教） 2．鸡胚接种：照蛋、划气室、尿囊腔接种0.1—0.15ml/胚 准备 名称 班组 数量 总计 备注 鸡胚 5 6 30 照蛋器、酒精棉球、碘酊、铅笔、蜡、酒精灯、镊子 1ml注射器 脏器、剪刀、盐水、100ml盐水瓶、双抗 种毒 实验七：病毒的收集及效价的测定 实验八：动物的免疫与接种 目的与要求 1．了解尿囊液的收获。 2．掌握血凝试验的基本操作与结果判定。 二．实验内容 1．收集尿囊液之前先吸出少量置微量平板内，而后每组将剩余的吸入一个盐水瓶中。 2．效价（毒力）的测定： a．加入50ul生理盐水于一排或一列（8或12孔） b．吸取50ul尿囊液于第一孔并做倍比稀释至倒数第二孔 c．向每孔加入50ul的红细胞悬液，振荡混匀后置室温或37度温箱20min d．观察结果：能使红细胞刚好凝集的最大稀释倍数即为病毒的效价。 3．鸡的免疫接种（略） 准备 名称 班组 数量 总计 备注 96孔微型板 微量移液器 枪头 振荡器 红细胞悬液 生理盐水（PBS）液 滴管 盐水瓶 实验九：抗原及疫苗的制备 实验十：抗体水平的检测 目的与要求 了解油乳剂苗的制备过程 掌握HI试验的操作及结果判定。 二．实验内容 1．油乳剂苗的制备（示教）：a抗原灭活：于收获的鸡胚尿囊液中加入0.1%甲醛，充分摇匀后于37℃温箱灭活16h。 b．油相的制备：取94%的白油，加入6%司本-80，混合后加入2%硬脂酸铝，121℃高压30min。 c．抗原水相的制备：向灭活抗原中加入4%吐温-80，充分溶解后备用。 d．乳化：油相与抗原水相按2：1~3：1的比例 ，先后将油相和抗原水相加入搅拌器，高速搅拌3min。 e．安检后分装。 2．4单位8单位抗原的制备：经HI试验测得的尿囊液凝集价，而后倍比稀释。 3．红细胞悬液的制备：翼下采血（20%抗凝剂），清洗红细胞，配成0。75%-1%的红细胞悬液。 4．抗体检测： a．加入50ul生理盐水于一排或一列（8或12