第五章紫外可见分光光度法教案分析.ppt

双光束光度计动画示意 * 5.4 分析条件的选择 5.4.1 测量条件的选择 ①吸光度的范围： T ∈ 20%~65%，A∈0.2～0.7之间 吸收最大的波长为入射光，干扰最小 5.4.2显色反应条件的选择 显色反应：将试样组分转变成有较强吸收的有色化合物的反应。 显色剂：与被测组分化合生成有色物质的试剂。 显色反应的条件： ① 定量反应、选择性要好； 干扰少。 ② 灵敏度要高，摩尔吸光系数ε大。 ③ 有色化合物的组成要恒定，化学性质要稳定。 ④ 有色化合物与显色剂的最大吸收波长之差≥60nm。 ⑤ 显色反应的条件要易于控制。 ②测定波长的选择： M 十 R ＝ MR（被测物）（显色剂）（有色配合物） * （2） 溶液酸度 （3） 显色温度及 显色时间 T1(℃) T2(℃) t(min) A 用量通过实验来确定 只能用于定性 （1） 显色剂用量： * 5.4.3 参比溶液（空白溶液）的选择 用于调节100%T，若选择不适当，对测量读数的影响较大。主要是消除溶液中其他组分对光的吸收等带来的影响。 （1） 溶剂参比液 当试液、试剂、显色剂均无色时，用溶剂(通 常是蒸馏水)作参比液； （3） 试剂参比液 如果显色剂或其他试剂略有吸收，可用不含 待测组分的试剂溶液作参比溶液。 （2） 试样参比液 如果试样中的其他组分也有吸收， 但不与显色 剂反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶液。 （4） 平行操作参比液 用不含待测组分的溶液，在相同条件下 与待测试样同时进行处理，此为平行操作参比溶液。 * 5.5 定性与定量分析 紫外-可见分光光度法主要用于有机物分析。 定性分析：比较吸收光谱特征可以对纯物质进行鉴定及杂质检查； 定量分析：利用光吸收定律进行分析 （1）定性鉴别： 5.5.1 定性分析 对比法：比较样品化合物的吸收光谱特征与标准化合物的吸收光谱特征；或与文献所载的化合物的标准谱图进行核对。 同一物质有相同吸收光谱图，反之不一定是同一物质。 * ②对比吸光度（或吸光系数） 相同条件下，同一物质吸光度比值是吸光系数的比值。 （2）纯度检查 ①杂质检查：有杂质时，吸收光谱变形。 ②杂质限量检查：a. 以某一波长吸光度值表示； b. 以峰谷吸光度比值表示。 ③对比吸收光谱的一致性 将试样与已知标准样品用同一溶剂配制成相同浓度的溶液，在同一条件下分别扫描吸收光谱，核对其一致性。 ①对比吸收光谱特征数据：λmax、 λmin、 λsh a. 不同基团化合物可能有相同的λmax值，但εmax有明显差别； b. 有相同吸光基团同系物，其λmax、 εmax值接近 ，但分子量不同，E1%1cm差别大。 A1/A2=E1/E2 * 5.5.2 定量分析 分光光度法被广泛的应用在各个领域，环境、医药、石油等测定无机、有机微量成份。由于操作简单，仪器廉价，一般说是常用的首选方法。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。 * 5.5.2 定量分析 分光光度法被广泛的应用在各个领域，环境、医药、石油等测定无机、有机微量成份。由于操作简单，仪器廉价，一般说是常用的首选方法。 （1）单组分的定量分析 ① 标准曲线（工作曲线）法： 配制一系列不同浓度的标准溶液，在同一条件下分别测定吸 光度，然后以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制A-C关系曲线。 符合朗-伯定律，则得到一条通过原点的直线。 根据测得样品吸光度，从标准曲线中求得样品溶液浓度，最后计算含量。 原理:根据朗伯-比尔定律，选择合适λ测A，求出浓度。 * ② 标准对照法 以该物质吸收光谱图中?max为入射光，配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液cS，测其AS，再将样品溶液推入光路，测其AX，则试样溶液的浓度cX为： ③ 吸光系数法： 根据朗-比定律，从已知的吸光系数K和液层厚度L，根据测得的吸光度值，求出溶液浓度和含量。 此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。 * （2）多组分的定量分析法 在含有多种组分的溶液中，如果要测定多个组分，可以根据情况的不同，采用不同的方法来进行测定。 测量依据——吸光度的加和