第04章紫外可见分光光度计教学指导.docVIP

第四章 紫外-可见分光光度计 首 页 基本要求 重点难点 讲授学时 内容提要 1． 基本要求 1.1了 解 (1)分光光度计的概念 (2)紫外光区和可见光区的波长范围 (3)紫外-可见分光光度计准确性的影响因素 (4)紫外-可见分光光度计的应用 1.2 熟 悉 (1) 紫外-可见分光光度计的性能指标 (2) 紫外-可见分光光度计的常见故障及排除方法 1.3 掌 握 (1)紫外-可见分光光度计工作原理 (2)紫外-可见分光光度计的基本结构及各部件的基本功能 (3)紫外-可见分光光度计的基本类型及其特点 2． 重点难点建议学时内容提要第一节第二节第三节 式中k为比例常数。 在光谱分析中，常常用吸光度表示溶液对入射光的吸收程度。吸光度与透光度的关系是：吸光度等于透光度的负对数，用A表示吸光度，有下列公式关系。 该公式表明，当用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度及溶液浓度的乘积成正比。此即朗伯-比尔定律。在朗伯-比尔定律中，比例常数k称为吸光系数。如果溶液浓度以物质的量的浓度表示时，此常数称为摩尔吸光系数（ε），它表示在一定波长下测得的液层厚度为1cm、溶液浓度c为1mol/L时的溶液吸光度值。如果溶液浓度以质量体积比表示时，此常数称为比吸光系数（），它表示当溶液浓度为1g/L、液层厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度值。摩尔吸光系数ε和比吸光系数可相互换算。 4.1.2 紫外-可见分光光度计的基本结构 紫外-可见分光光度计的基本结构由光源、单色器、池检测器系统五部分组成钨灯卤钨灯氢灯氘灯汞灯等多种。钨灯卤钨灯钨灯卤钨灯氢灯氘灯汞灯发射的能量绝大部分集中在253nm波长）①单光束光路，从光源到试样至接收器只有一个光通道，使用中依次对参考样品和待测试样进行测定，然后将二次测定数据进行比较、计算，获得最终结果；②只有一个色散元件，工作波长范围较窄；③通常采用直接接收放大显示的简单电子系统，用电表或数字显示；④结构简单、附件少、功能范围小，不能做特殊试样测定。目前国内常用的721型分光光度计和751型分光光度计均为单光束分光光度计，其结构示意图分别见图2和图3。 4.2.2 双光束分光光度计 双光束分光光度计在其出射狭缝和样品吸收池之间增加了一个光束分裂器或斩波器，作用是以一定的频率将一个光束交替分成两路，使一路经过参比溶液，另一路经过样品溶液，然后由一个检测器交替接收或由两个检测器分别接收两路信号，这是目前国内外使用最多，性能较为完善的一类分光光度计。双光束分光光度计结构示意图见图4。 光源 单色器 斩波器 吸收池 检测器 图4 双光束分光光度计光路图 4.2.3 双波长分光光度计 双波长分光光度计的基本工作原理是从同一光源发出的光被分为两束，分别经两个单色器分光后得到两束不同波长（λ1，λ2）的单色光，经切光器使两束光以一定频率交替照射同一样品，然后经过检测器显示出两个波长下的吸光度差值（ΔA=Aλ2-Aλ1） 只要λ1、λ2选择适当（被测物在一个波长上有最大吸收峰，在另一个波长上没有吸收或很少吸收；而非被测物在两个波长上的吸收是相同的），ΔA就是消除了非特征性吸收干扰（即扣除了背景吸收）的吸光度值。双波长分光光度计不用参比溶液，只用一个待测溶液，能较好的解决由于非特征吸收信号（如试样的浑浊、吸收池与空气界面以及吸收池与溶液界面的折射差别等）影响而带来的误差，大大提高检测的准确度。 4.3 紫外-可见分光光度计的性能指标%T或0%T时基线倾斜或弯曲的程度，是仪器的重要性能指标之一。 4.3.2 分光光度计准确性的影响因素 （1）单色光不纯的影响 光的吸收定律只是在入射光为单色光的条件下成立，通常所指的单色光是指有一定谱带宽度的光谱。由于单色器的类型和质量不同，得到的单色光纯度不同，加上使用中狭缝宽度调节不当，都可造成入射光的单色性不纯。各种原因引起的单色光不纯都可使仪器读数不准，造成分光光度计的测量误差。 （2）杂散光的影响 杂散光会严重影响检测准确度。有两种原因引起的杂散光对检测结果具有较大影响：①仪器中光学、机械零件的反射和散射等原因使所采用的测定波长的光偏离正常光路，在不通过样品的情况下直接照射到单色器。这种杂散光波长与测定波长相同；②由仪器的光